Descripción del proyecto
LAS FACTORIAS VIRALES SON PROBABLEMENTE EL EJEMPLO MAS EXTREMO DE COMO LOS VIRUS SON CAPACES DE MANIPULAR LA ORGANIZACION DE LAS CELULAS, SON ESTRUCTURAS COMPLEJAS QUE SE FORMAN AL COMIENZO DE LA INFECCION MEDIANTE RECLUTAMIENTO DE COMPONENTES VIRALES Y CELULARES QUE CONSTRUYEN UN ANDAMIAJE EN EL QUE SE DESARROLLAN LAS DISTINTAS ETAPAS DEL CICLO VITAL DEL VIRUS, COMO LA REPLICACION DEL GENOMA Y LA MORFOGENESIS DE NUEVAS PARTICULAS INFECCIOSAS, SE DISPONE DE DATOS MUY ESCASOS SOBRE LAS RUTAS DE SEÑALIZACION IMPLICADAS EN LA CONSTRUCCION DE LAS FACTORIAS VIRALES, EN EL LABORATORIO ESTAMOS INTERESADOS EN COMPRENDER LA ESTRUCTURA Y ACTIVIDADES DE LAS FACTORIAS DE VARIOS VIRUS ARN QUE PERTENECEN A FAMILIAS DE IMPORTANTES PATOGENOS HUMANOS, SIMULTANEAMENTE UTILIZAMOS LOS VIRUS COMO HERRAMIENTAS EXPERIMENTALES PARA ESTUDIAR LA ARQUITECTURA CELULAR, EN ESTE CONTEXTO UNO DE NUESTROS OBJETIVOS ES INCORPORAR METODOS DE DETECCION ESPECIFICA DE MACROMOLECULAS EN MAPAS TRIDIMENSIONALES (3D) DE CELULAS COMPLETAS, LA TOMOGRAFIA ELECTRONICA (TE) ES UNA TECNICA MUY PODEROSA QUE PERMITE OBTENER MAPAS 3D DE LA ULTRAESTRUCTURA CELULAR CON RESOLUCION MACROMOLECULAR SI SE COMBINA CON UNA PRESERVACION DE LAS CELULAS EN UN ESTADO CERCANO AL NATIVO, RECIENTEMENTE HEMOS OPTIMIZADO VARIOS PROTOCOLOS PARA MICROSCOPIA CORRELATIVA, CONSISTENTE EN LA OBSERVACION DE LA MISMA CELULA MEDIANTE MICROSCOPIA DE CELULA VIVA Y MICROSCOPIA ELECTRONICA, ASI COMO METODOS DE CONGELACION A ALTA PRESION, TOMOGRAFIA ELECTRONICA Y RECONSTRUCCION TRIDIMENSIONAL DE CELULAS COMPLETAS, TAMBIEN HEMOS VALIDADO UN TAG CLONABLE PARA SU UTILIZACION A NIVEL ULTRAESTRUCTURAL, ESTE TAG PARA MICROSCOPIA ELECTRONICA, EL PRIMERO VALIDADO EN CELULAS VIVAS, SE BASA EN UNA PROTEINA QUE UNE METALES, LA METALOTIONEINA (MT), SU USO PARA LA DETECCION DE PROTEINAS ES EQUIVALENTE AL DE LA PROTEINA VERDE FLUORESCENTE (GREEN FLUORESCENT PROTEIN O GFP) UTILIZADA AMPLIAMENTE EN MICROSCOPIA OPTICA, LA MT ES CASI CINCO VECES MAS PEQUEÑA QUE LA GFP Y FUSIONADA A LA PROTEINA DE INTERES PERMITE SU DETECCION CON EL PODER DE RESOLUCION DE LA MICROSCOPIA ELECTRONICA PORQUE SE VUELVE ELECTRON-DENSA AL SER TRATADA CON SALES DE ORO, ESTA HERRAMIENTA SERA MUY VALIOSA PARA LA INTERPRETACION MOLECULAR DE LOS COMPLEJOS TOMOGRAMAS DE ESTRUCTURAS CELULARES EVITANDO LAS LIMITACIONES ASOCIADAS AL USO DE ANTICUERPOS, EN ESTE PROYECTO PROPONEMOS UTILIZAR ESTE CONJUNTO DE METODOS NUEVOS DE ANALISIS ESTRUCTURAL JUNTO CON HERRAMIENTAS MOLECULARES RELACIONADAS CON LOS VIRUS OBJETO DE ESTUDIO PARA OBTENER INFORMACION COMPLETAMENTE NUEVA SOBRE LAS RELACIONES ESTRUCTURA-FUNCION QUE OPERAN EN SISTEMAS BIOLOGICOS MUY COMPLEJOS COMO LOS QUE REPRESENTAN LAS FACTORIAS VIRALES CONSTRUIDAS POR LOS VIRUS ARN, EL VIRUS RUBELLA Y LOS BUNYAVIRUS SON IMPORTANTES PATOGENOS HUMANOS QUE VENIMOS ESTUDIANDO DESDE EL AÑO 1999, CON ESTOS VIRUS NOS PROPONEMOS: 1) ESTUDIAR LA BIOGENESIS DE LAS FACTORIAS VIRALES DE BUNYAVIRUS Y VIRUS RUBELLA; 2) CARACTERIZAR LA ORGANIZACION MOLECULAR DE LOS COMPLEJOS REPLICATIVOS ENSAMBLADOS POR LOS VIRUS EN MEMBRANAS CELULARES; Y 3) OBTENER INFORMACION NUEVA SOBRE EL ENSAMBLAJE Y MADURACION DE LAS PARTICULAS VIRALES, SIMULTANEAMENTE EXPLORAREMOS NUEVOS TAGS MEJORADOS PARA MICROSCOPIA CORRELATIVA Y TOMOGRAFIA ELECTRONICA, ESTE TERRITORIO POCO EXPLORADO PUEDE AYUDARNOS A COMPRENDER COMO LOS VIRUS MANIPULAN LAS CELULAS, PUDIENDO ADEMAS PROPORCIONAR INFORMACION NUEVA SOBRE PROCESOS CELULARES, VIRUS ARN\FACTORIA VIRAL\REPLICACION\MORFOGENESIS\MICROSCOPIA ELECTRONICA 3D\MAPEO MOLECULAR\TAGS CLONABLES