Descripción del proyecto
LOS METODOS ACTUALES DE SEGUIMIENTO DE LA INTERACCION PATOGENO-HOSPEDADOR ESTAN MUY LEJOS DE SER IDEALES PARA PODER ENTENDER LOS PROCESOS BIOLOGICOS QUE OCURREN EN LOS ANIMALES IN VIVO, EN LOS ENSAYOS CONVENCIONALES DE INTERACIONES PATOGENO-HOSPEDADOR SE REQUIERE QUE LOS ANIMALES EXPERIMENTALES SEAN EUTANASIADOS A TIEMPOS VARIABLES PARA IDENTIFICAR LOS SITIOS DE INFECCION Y PODER CUANTIFICAR LAS CANTIDADES DE PATOGENO EN DISTINTOS LUGARES ANATOMICOS, ESTE DESARROLLO ESTRATEGICO UTILIZADO PARA ANALIZAR LA PATOGENESIS Y EL TRATAMIENTO, TIENE GRANDES LIMITACIONES PARA PODER SER APLICADO AL ESTUDIO DE LA INFECCION Y LA EFICACIA DE NUEVOS FARMACOS, ENTRE LAS LIMITACIONES CABE DESTACAR: I) EL ANALISIS INDIVIDUAL DE ANIMALES A VARIOS TIEMPOS PUNTUALES, EXCLUYE UN SEGUIMIENTO REAL EN LA PROGRESION ESPACIO-TEMPORAL EN INFECCIONES EN EL MISMO ANIMAL, QUE PUEDEN REVELAR VARIACIONES BIOLOGICAMENTE RELEVANTES EN LA INTERACCION PATOGENO-HOSPEDADOR, II) LA DISEMINACION DE UN PATOGENO A UN SITIO INESPERADO DE INFECCION SE PUEDE PERDER YA QUE EL TEJIDO INFECTADO NO FUE RECOGIDO Y ANALIZADO, III) ENSAYOS CONVENCIONALES DE PATOGENESIS REQUIEREN UN ENORME NUMERO DE ANIMALES PARA OBTENER DATOS ESTADISTICAMENTE SIGNIFICATIVOS EN TODOS LOS PUNTOS DE TIEMPO DEL ENSAYO, PARA INVESTIGAR MEJOR LA EXPANSION DEL PARASITO, AMBOS EX VIVO E IN VIVO EN CELULAS, DE FORMA REAL, NO DESTRUCTIVA, SE NECESITAN METODOS DE MONITORIZACION EN TIEMPO REAL, QUE SEAN ADAPTABLES A LOS MODELOS DE EXPERIMENTACION ANIMAL, CON ESTE FIN LOS GENES REPORTEROS OFRECEN UN METODO DE MARCADO DEL MICROORGANISMO NO INVASIVO QUE ES INOCUO Y PERMITE LA DETECCION SENSIBLE DE CELULAS METABOLICAMENTE ACTIVAS POR IMAGEN BIOFOTONICA, OBJETIVOS:1, CLONADO DE GENES REPORTEROS (LUCIFERASAS Y GFPS ) EN EL VECTOR PLEXSY (JENA BIOSCIENCE) CON INTENCION DE QUE PUEDA SER INTEGRADO EN LA REGION DEL DNA RIBOSOMAL DE LEISHMANIA A FIN DE OBTENER UNA EXPRESION CONSTITUTIVA Y ALTA,2, INTEGRACION DEL REPORTERO EN LA REGION DEL DNA RIBOSOMAL DE LEISHMANIA, SELECCION DE CLONES POSITIVOS EN INTEGRACION,3, INFECCIONES EXPERIMENTALES IN VITRO EN MACROFAGOS, SEGUIMIENTO DE LA INFECCION Y SU INHIBICION MEDIANTE IMAGEN IN VIVO,4, INFECCIONES EXPERIMENTALES IN VIVO EN ANIMALES, SEGUIMIENTO DE LA INFECCION Y SU TRATAMIENTO MEDIANTE IMAGEN IN VIVO, LEISHMANIA\INTERACCION PARASITO-HOSPEDADOR\IMAGEN IN VIVO A TIEMPO REAL\DESARROLLO DE NUEVOS FAMACOS