Descripción del proyecto
EN EL PROYECTO ANTERIOR, HEMOS CARACTERIZADO EL PAPEL QUE DESEMPEÑA LA SINAPTOTAGMINA-7 EN REGULAR LA CINETICA DEL PORO DE FUSION DURANTE LA EXOCITOSIS EN CELULAS CROMAFINES MURINAS, LOS RESULTADOS HAN SIDO MUY LLAMATIVOS (ENVIADOS PARA SU PUBLICACION AL PNAS) Y SUGIEREN QUE EL DOMINIO C2B DE LA SINAPTOTAGMINA-7 FACILITA LA EXPANSION DEL PORO DE FUSION AL UNIR IONES DE CALCIO EN EL CITOSOL, PARA NUESTRA SORPRESA, OTRA PARTE DE LA MOLECULA DE SINAPTOTAGMINA-7 DEBE PARTICIPAR EN EL CIERRE DEL PORO DE FUSION, YA QUE HEMOS OBSERVADO UN INCREMENTO MASIVO EN EL NUMERO DE EVENTOS TRANSITORIOS DE FUSION (¿KISS-AND-RUN¿) EN CELULAS DEL RATON MUTANTE DE SINAPTOTAGMINA-7 DONDE EL DOMINIO C2B SE HA MODIFICADO PARA QUE NO UNA IONES DE CALCIO, EN ESTAS CONDICIONES, EL PORO DE FUSION NO SE EXPANDE CON NORMALIDAD, DANDO MAS TIEMPO A QUE SE PRODUZCA EL CIERRE CUANDO EL RESTO DE LA MOLECULA SE ENCUENTRA INTACTA, NUESTROS DATOS DEMUESTRAN DE FORMA INEQUIVOCA EL PAPEL DE UNA PROTEINA EN EL CIERRE DEL PORO DE FUSION DANDO LUGAR A UN FENOMENO DE LIBERACION DEL TIPO ¿KISS-AND-RUN¿, CON LOS EXPERIMENTOS REALIZADOS EXCLUSIVAMENTE CON AMPEROMETRIA CONVENCIONAL NO ES POSIBLE CONOCER SI LA LIBERACION SE HA PRODUCIDO MEDIANTE UNA FUSION TRANSITORIA O NO, LA POTENCIA DE NUESTRO ABORDAJE EXPERIMENTAL, DONDE MEDIMOS CON PRECISION LOS CAMBIOS DE LA SUPERFICIE DE MEMBRANA DEBIDO A UNA UNICA VESICULA SECRETORA CON TECNICAS DE CAPACITANCIA Y MEDIR PRODUCTOS LIBERACION DE CATECOLAMINAS CON ELECTROQUIMICA ¿ LA AMPEROMETRIA EN PARCHE ¿ ES INIGUALABLE HASTA LA FECHA PARA ESTUDIAR LA CINETICA DEL PORO DE FUSION, PROPONEMOS EN ESTE PROYECTO IDENTIFICAR QUE PARTE DE LA MOLECULA DE SINAPTOTAGMINA-7 PARTICIPA EN EL CIERRE DEL PORO DE FUSION, EN PRIMER LUGAR UTILIZAREMOS RATONES MUTANTES DE SINAPTOTAGMINA-7 DONDE EL DOMINO C2A SE HA ALTERADO PARA QUE NO LIGUE CALCIO (PROPORCIONADO POR EL DR, THOMAS SUDHOF, UNIVERSIDAD DE STANFORD, EE,UU,), EN OTRA LINEA DE EXPERIMENTOS, REALIZAREMOS TRANSFECCIONES DE UN PLASMIDO CON DISTINTO NUMERO DE AMINOACIDOS ENTRE LOS DOS DOMINIOS C2 EN EL RATON MUTANTE NULO SINAPTOTAGMINA-7, SINAPTOTAGMINA\PORO DE FUSION\EXOCITOSIS\PATCH-CLAMP\CAPACITANCIA\AMPEROMETRIA