Descripción del proyecto
SE INVESTIGARAN LOS FACTORES QUE AFECTAN LA INTERRELACION ENTRE LA RECOMBINACION HOMOLOGA (RH), LA REPARACION NO-HOMOLOGA CON UNION DE EXTREMOS (NHEJ) Y LA SEGREGACION DEL MATERIAL GENETICO EN FIRMICUTES USANDO COMO MODELOS A BACILLUS SUBTILIS Y AL PLASMIDO PSM19035, LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO SE DIVIDE EN 5 TAREAS DIFERENTES: (1) SE CARACTERIZARA A NIVEL GENETICO LOS MUTANTES EN LOS GENES RARA, RECX, RECD, CBF1, PNPA, MUTS2 O DISA, (2) SE ESTUDIARA A NIVEL MOLECULAR LAS REDES NUCLEOPROTEICAS ASOCIADAS CON LOS COMPLEJOS DE REPARACION ¿CENTRO DE REPARACION, CR¿ QUE SE FORMA AL INTRODUCIRSE CORTES EN AMBAS HEBRAS DEL DNA (¿DOUBLE STRAND BREAKS¿, DSBS), SE DEFINIRAN LOS COMPONENTES, EL ORDEN ESPACIO-TEMPORAL DE ENSAMBLADO DE LAS DISTINTAS PROTEINAS EN UN CR Y LAS REGIONES DE INTERACCION ENTRE ELLOS USANDO TECNICAS DE TAP-TAG Y FRET (BRET) IN VIVO, (3) SE RECONSTITUIRA PARCIALMENTE LA ETAPA TEMPRANA DE LA RH, UTILIZANDO COMPONENTES PURIFICADOS, SE ESTUDIARA EL EFECTO DE RECR, USANDO LA PROTEINA SILVESTRE (WT) COMO VARIANTES MUTANTES DE ESTA, EN LA ACTIVIDAD DE RECO O RECF, LAS ACTIVIDADES DE LAS PROTEINAS SSBA, SSBB, DPRA Y RECU, QUE UNEN DNA DE CADENA SENCILLA (SSDNA), EN EL ENSAMBLADO DE RECA EN SSDNA Y EL PAPEL DE RECF-RECO-RECR EN LA ACTIVIDAD DE LAS TRES PROTEINAS QUE UNEN DNA DE CADENA SENCILLA, (4) SE RECONSTITUIRA PARCIALMENTE LA ETAPA TARDIA DE LA RH CON COMPONENTES PURIFICADOS, SE ESTUDIARA EL EFECTO DE RECU, RUVA O RUVB, WT COMO VARIANTES MUTANTES, EN RARA, DISA Y MUTS2, SE ESTUDIARA LA INTERRELACION ENTRE RECU, RUVAB, RARA, DISA, MUTS2 Y RECG Y ENTRE ESTOS Y LOS FACTORES QUE GOBIERNAN A MAQUINARIA DE RESOLUCION DE ESTRUCTURAS DE HOLLIDAY (HJ), (5) SE RECONSTITUIRA, CON COMPONENTES PURIFICADOS, EL SEGROSOMA (PROTEINAS ω2 Y δ2) Y LA INTERRELACION DEL GENUINO SISTEMA DE PARTICION CON EL DE MUERTE POST-SEGREGACIONAL (PROTEINAS ε Y ζ2), LOS RESULTADOS DE LAS TAREAS 1 A 4 NOS PERMITIRAN ENTENDER: (I) LA INFLUENCIA DE LA RH Y NHEJ EN LA DERIVA GENETICA DE LAS ESPECIES, (II) LAS BARRERAS QUE CONTROLAN LA REPARACION DEL DNA DAÑADO, LA ORGANIZACION ESPACIO-TEMPORAL DE LA COMPLEJA MAQUINARIA DE RECONOCIMIENTO Y REPARACION DEL DAÑO, LAS PROTEINAS INVOLUCRADAS EN ESA INTRINCADA RED DE PROTEINAS Y EL COMPLEJO CONTROL QUE MODULA LA NUCLEACION DE RECA EN EL DNA, (III) LOS FACTORES QUE MODULAN QUE LAS HJ SE RESUELVAN DANDO PRODUCTOS NO RECOMBINANTES, ¿NON-CROSSOVERS¿, QUE PERMITEN LA FORMACION DE GENOMAS MONOMERICOS EN UN DNA CIRCULAR, (IV) LA INTERRELACION ENTRE LA RH Y NHEJ, Y LA SEGREGACION CROMOSOMICA, MIENTRAS QUE LOS RESULTADOS DE LA TAREA 5 NOS PERMITIRAN ENTENDER EL MECANISMO DE PARTICION, LA APOPTOSIS BACTERIANA, Y EL EFECTO DE LAS TOXINAS EN LA RE-EVALUACION DEL MECANISMO DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS Y DE MULTI-TOLERANCIA A ANTIBIOTICOS (¿PERSISTENCIA¿), NUESTROS OBJETIVOS SON PODER ENTENDER LA MAQUINARIA RESPONSABLE DE LA INESTABILIDAD ESTRUCTURAL Y SEGREGACIONAL DEL MATERIAL GENETICO INTRODUCIDO EN BACTERIAS DEL FILO FIRMICUTES Y SU POSIBLE EXTRAPOLACION A OTRAS BACTERIAS, RECOMBINACION HOMOLOGA\SEGREGACION CROMOSOMICA\REPARACION DEL ADN\TOXINAS-ANTITOXINAS\AGENTES ANTIMICROBIANOS