Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO DE INVESTIGACION TIENE COMO OBJETIVO GENERAL LA IDENTIFICACION Y VALIDACION DE GENES DIANA QUE PUEDAN SER DE UTILIDAD PARA INCREMENTAR LA PROPORCION DE CARBOHIDRATOS DE LA DIETA DESTINADOS A FINES ENERGETICOS EN DORADAS (SPARUS AURATA) PRODUCIDAS EN GRANJAS MARINAS, PRESERVANDO UNA MAYOR PROPORCION DE PROTEINA PARA EL CRECIMIENTO. EN LA ACTUALIDAD, LOS DATOS GENOMICOS Y TRANSCRIPTOMICOS DISPONIBLES PARA ESTA ESPECIE SON MUY ESCASOS, LO QUE LIMITA LA REALIZACION DE ESTUDIOS DE GENOMICA FUNCIONAL CON FINES NUTRICIONALES. EN ESTE PROYECTO, DETERMINAREMOS SI LA MODULACION DE LA EXPRESION DE GENES SELECCIONADOS MEDIANTE EL ANALISIS DEL TRANSCRIPTOMA Y MICROARRAYS, PUEDE INCREMENTAR LA METABOLIZACION DE LOS CARBOHIDRATOS DE LA DIETA PARA OBTENER ENERGIA Y, POR OTRA PARTE, REDUCIR EL CATABOLISMO DE AMINOACIDOS EN S. AURATA. ASI, SE PODRIA IMPLEMENTAR LA SUSTITUCION PARCIAL DE PROTEINAS POR CARBOHIDRATOS EN LOS PIENSOS SUMINISTRADOS EN PISCICULTURA, LO QUE ABARATARIA LOS COSTES DE PRODUCCION. DADO QUE LAS HARINAS DE PESCADO SUMINISTRADAS EN LOS PIENSOS DESTINADOS A LA PISCICULTURA SON ALTAMENTE DEPENDIENTES DE LAS PESQUERIAS, A MENUDO SOBREEXPLOTADAS, CUALQUIER AVANCE QUE PERMITA REDUCIR LA CANTIDAD DE PROTEINA DE PESCADO PRESENTE EN LOS PIENSOS TENDRIA UN IMPACTO RELEVANTE A NIVEL ECONOMICO, AMBIENTAL, Y SOBRE EL ECOSISTEMA MARINO Y LA BIODIVERSIDAD, PERMITIENDO LA SOSTENIBILIDAD DE LA ACUICULTURA. POR OTRA PARTE, LOS EFECTOS NEGATIVOS QUE CAUSA LA ACUICULTURA A NIVEL LOCAL POR ACUMULACION DE AMONIO EXCRETADO Y MATERIA ORGANICA, PODRIAN VERSE PALIADOS POR UNA DISMINUCION DEL CATABOLISMO DE AMINOACIDOS DE LOS PECES EN CULTIVO.LOS OBJETIVOS ESPECIFICOS DE ESTE PROYECTO SON:A) LA SECUENCIACION GLOBAL A NIVEL TRANSCRIPTOMICO DE BIBLIOTECAS DE CDNA OBTENIDAS A PARTIR DE TEJIDOS AISLADOS DE JUVENILES DE S. AURATA ALIMENTADOS CON DIETAS QUE DIFIERAN EN LA COMPOSICION DE NUTRIENTES. EL ANALISIS DEL TRANSCRIPTOMA SE REALIZARA MEDIANTE SECUENCIACION MASIVA 454 PARA GENERAR UNA COLECCION DE SECUENCIAS EST (EXPRESSED SEQUENCE TAGS) DE AMPLIA COBERTURA QUE, ADEMAS DE SER UTIL PARA LOS FINES PROPUESTOS EN ESTE PROYECTO, COMO RECURSO PUBLICO EN LAS BASES DE DATOS FACILITARIA EL AVANCE DE OTROS ESTUDIOS DE GENOMICA FUNCIONAL. CON EL FIN DE OBTENER LA REPRESENTACION MAS AMPLIA POSIBLE DE TRANSCRITOS, LAS BIBLIOTECAS DE CDNA SERAN NORMALIZADAS ANTES DE PROCEDER A SU SECUENCIACION AL OBJETO DE INCREMENTAR LA PRESENCIA DE TRANSCRITOS POCO FRECUENTES.B) DISEÑAR MICROARRAYS PARA IDENTIFICAR GENES POTENCIALMENTE IMPLICADOS EN LA ADAPTACION METABOLICA DE S. AURATA A CAMBIOS EN LA COMPOSICION DE LA DIETA. SE DISEÑARAN MICROARRAYS DE OLIGONUCLEOTIDOS A PARTIR DE LAS SECUENCIAS EST GENERADAS POR EL ANALISIS DEL TRANSCRIPTOMA PARA IDENTIFICAR GENES CON EXPRESION DIFERENCIAL EN HIGADO Y MUSCULO ESQUELETICO DE JUVENILES DE S. AURATA ALIMENTADOS CON DIETAS QUE DIFIERAN EN LA COMPOSICION DE NUTRIENTES.C) COMPROBAR LA UTILIDAD DE LOS GENES SELECCIONADOS COMO DIANAS BIOTECNOLOGICAS A FIN DE INCREMENTAR LA UTILIZACION DE LOS CARBOHIDRATOS DE LA DIETA Y A SU VEZ REDUCIR EL USO DE AMINOACIDOS COMO FUENTE DE ENERGIA. LA VALIDACION SE LLEVARA A CABO MEDIANTE EL ANALISIS IN VIVO DE LOS CAMBIOS METABOLICOS CAUSADOS POR LA SOBREEXPRESION Y SILENCIAMIENTO DE LOS GENES DIANA. SE ANALIZARAN LOS CAMBIOS METABOLICOS MEDIANTE TRANSCRIPCION INVERSA-PCR CUANTITATIVA A TIEMPO REAL (QPCR), ENSAYOS DE ACTIVIDAD ENZIMATICA Y DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR (RMN).