Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO PRETENDE COMPROBAR SI EL CONTROL DE LA EXPRESION DE GENES CLAVE EN LA OXIDACION DE AMINOACIDOS Y LA GLUCOLISIS PERMITE AHORRAR PROTEINA EN LAS DIETAS SUMINISTRADAS PARA LA PRODUCCION DE DORADA (SPARUS AURATA), EL PEZ MAS CULTIVADO EN ESPAÑA. ESTE EFECTO AYUDARIA A PRESERVAR LOS AMINOACIDOS DE LA DIETA FUNDAMENTALMENTE PARA SINTETIZAR PROTEINAS Y FACILITARIA LA UTILIZACION DE LOS CARBOHIDRATOS COMO COMBUSTIBLE PARA PRODUCIR ENERGIA. LAS HARINAS DE PESCADO, FUENTE PRINCIPAL DE PROTEINAS EN LOS PIENSOS ACUICOLAS, SON ALTAMENTE DEPENDIENTES DE LAS CAPTURAS EN CALADEROS PESQUEROS, A MENUDO SOBREEXPLOTADOS. CUALQUIER ESFUERZO QUE PERMITA REDUCIR PROTEINAS Y HARINA DE PESCADO EN LOS PIENSOS DE USO ACUICOLA CONLLEVARIA UNA REDUCCION DE LOS COSTOS DE PRODUCCION, ASI COMO DE LA DEPENDENCIA DE CAPTURAS PESQUERAS Y SOBRE EL IMPACTO MEDIOAMBIENTAL DE LA ACUICULTURA.OBJETIVOS ESPECIFICOS DEL PROYECTO:A) ESTUDIAR EL EFECTO METABOLICO DE LA ADMINISTRACION INTRAPERITONEAL DE NANOPARTICULAS DE QUITOSANO-TRIPOLIFOSFATO (TPP), ACOMPLEJADAS CON PLASMIDOS QUE PERMITAN: I) DISMINUIR LA TASA DE OXIDACION HEPATICA DE AMINOACIDOS, MEDIANTE LA PRODUCCION DE SHRNAS QUE SILENCIEN LA EXPRESION DE GLUTAMATO DESHIDROGENASA (GDH); II) ESTIMULAR EL FLUJO GLUCOLITICO A TRAVES DEL CICLO DE SUSTRATO GLUCOSA/GLUCOSA-6-FOSFATO EN HIGADO, UTILIZANDO PLASMIDOS QUE SOBREEXPRESEN GLUCOQUINASA (GK) O PRODUZCAN SHRNAS PARA SILENCIAR LA EXPRESION DE GLUCOSA-6-FOSFATASA (G6PASA); Y III) PROMOVER LA GLUCOLISIS Y LA SINTESIS DE ACIDOS GRASOS A NIVEL HEPATICO MEDIANTE LA SOBREEXPRESION DE SREBP-1A, FACTOR DE TRANSCRIPCION QUE, ADEMAS DE ESTIMULAR LA EXPRESION DE GENES LIPOGENICOS, MEDIA EN LA TRANSACTIVACION POSTPRANDIAL DE LOS PROMOTORES DE GK Y 6-FOSFOFRUCTO-2-QUINASA/FRUCTOSA-2,6-BISFOSFATASA EN DORADA.B) EVALUAR EL EFECTO SOBRE EL CRECIMIENTO DE LA ADMINISTRACION DE NANOPARTICULAS DE QUITOSANO-TPP-DNA PARA SILENCIAR LA EXPRESION HEPATICA DE GDH Y G6PASA, Y SOBREEXPRESAR GK Y SREBP-1A EN DORADA.C) UTILIZAR LA TECNOLOGIA DE LOS MICROARRAYS PARA ANALIZAR CAMBIOS EN EL PATRON GLOBAL DE EXPRESION GENICA EN HIGADO DE DORADAS TRATADAS CON QUITOSANO-TPP-DNA PARA SILENCIAR LA EXPRESION DE GDH Y G6PASA, Y SOBREEXPRESAR GK Y SREBP-1A A NIVEL HEPATICO.PARA ABORDAR ESTOS OBJETIVOS, SE ANALIZARA EL EFECTO DEL CONTROL TRANSITORIO DE LA EXPRESION GENICA EN ALEVINES DE DORADA ALIMENTADOS CON DOS DIETAS EXPERIMENTALES ISOCALORICAS: UNA CON COMPOSICION SIMILAR A LOS PIENSOS COMERCIALES PARA DORADAS EN CULTIVO, Y OTRA CON PARTE DE LA PROTEINA SUSTUIDA POR CARBOHIDRATOS. LOS EFECTOS METABOLICOS SE EVALUARAN ENSAYANDO: ACTIVIDADES ENZIMATICAS, RT-PCR CUANTITATIVA A TIEMPO REAL, COMPOSICION DE AMINOACIDOS, PERFIL DE ACIDOS GRASOS, ANALISIS DE ESTRES OXIDATIVO, PERFIL METABOLICO POR RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR Y ANALISIS POR MICROARRAYS PARA ESTUDIAR CAMBIOS GLOBALES EN LA EXPRESION GENICA. EL CRECIMIENTO Y EL APROVECHAMIENTO DE LOS NUTRIENTES DE LA DIETA SE ANALIZARA DETERMINANDO: TASA DE CRECIMIENTO ESPECIFICO, COMPOSICION CORPORAL, TASA DE CONVERSION DEL ALIMENTO Y RETENCION DE PROTEINAS Y GRASAS DE LA DIETA.ADEMAS DE GENERAR RESULTADOS POTENCIALMENTE RELEVANTES PARA PROMOVER UNA ACUICULTURA MAS SOSTENIBLE, LOS RESULTADOS DERIVADOS DE ESTE PROYECTO PODRAN TRANSFERIRSE A EMPRESAS DE ACUICULTURA PARA LA MEJORA DE LA PRODUCCION DE DORADA EN ESPAÑA. ONTROL DE LA EXPRESIÓN GÉNICA\DORADA\SREBP-1A\GLUCOSA-6-FOSFATASA\GLUCOQUINASA\GLUTAMATO DESHIDROGENASA\QUITOSANO