GENOMICA FUNCIONAL PARA EL ESTUDIO DE LA RETINOSIS PIGMENTARIA
A MEDIDA QUE SE INCREMENTA EL CONOCIMIENTO SOBRE LAS BASES MOLECULARES DE LAS PATOLOGIAS HUMANAS SURGEN NUEVOS NIVELES DE COMPLEJIDAD, CUYO ESTUDIO REQUIERE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINAR, RECIENTEMENTE, HEMOS ASISTIDO A LA SECUENCIA...
A MEDIDA QUE SE INCREMENTA EL CONOCIMIENTO SOBRE LAS BASES MOLECULARES DE LAS PATOLOGIAS HUMANAS SURGEN NUEVOS NIVELES DE COMPLEJIDAD, CUYO ESTUDIO REQUIERE UN ENFOQUE MULTIDISCIPLINAR, RECIENTEMENTE, HEMOS ASISTIDO A LA SECUENCIACION COMPLETA DE MUCHOS GENOMAS, ESTE INGENTE ACUMULO DE INFORMACION NO SE CORRESPONDE CON UN CRECIMIENTO CONCEPTUAL COMPARABLE DE LA FUNCION GENICA, ESTA DICOTOMIA ES AUN MAS CLARA CUANDO SE ANALIZAN PROCESOS BIOLOGICOS COMPLEJOS QUE, COMO LA VISION, REQUIEREN LA PARTICIPACION DE NUMEROSAS VIAS MOLECULARES, ESTE PROYECTO PROPONE REALIZAR UN ESTUDIO DE GENOMICA FUNCIONAL PARA LA CARACTERIZACION DE LOS GENES QUE CAUSAN RETINOSIS PIGMENTARIA (RP), UNA PATOLOGIA HEREDITARIA DE LA RETINA QUE CONSTITUYE LA CAUSA PRINCIPAL DE CEGUERA EN EL ADULTO Y QUE, AUN HOY DESPUES DE INTENSOS ESTUDIOS, NO TIENE UN TRATAMIENTO EFICAZ, ACTUALMENTE, HAY 40 GENES RP DESCRITOS, PERO SE ESTIMA QUE QUEDAN TODAVIA MUCHOS POR DESCUBRIR, EL ESTUDIO PROPUESTO SE ENFOCA A TRES NIVELES DISTINTOS: I) ANALISIS FUNCIONAL DE CERKL (GEN RP DESCRITO POR ESTE EQUIPO) MEDIANTE ENSAYOS DE LIPIDOMICA Y TRANSCRIPTOMICA, II) IDENTIFICACION DE NUEVOS GENES RP MEDIANTE ANALISIS DE LIGAMIENTO EN PLATAFORMAS DE GENOTIPADO, Y III) ESTUDIO ELECTROFISIOLOGICO, MOLECULAR Y CELULAR DE UN RATON TRANSGENICO KNOCKOUT TOTAL CERKL-/-, CUYA CONSTRUCCION ESTA YA FINALIZANDO, EL PRIMER OBJETIVO ABORDARA EL ANALISIS FUNCIONAL DE CERKL, GEN RECIENTEMENTE IDENTIFICADO POR ANALISIS DE LIGAMIENTO CLASICO EN EL LOCUS RP26 (TUSON ET AL,, AM J HUM GENET 74:128¿138, 2004), ESTUDIOS FUNCIONALES POSTERIORES HAN DEMOSTRADO QUE CERKL INTERVIENE EN EL METABOLISMO DE ESFINGOLIPIDOS Y EJERCE UNA FUNCION PROTECTORA EN LA RETINA, REGULANDO LA SUPERVIVENCIA DE LOS FOTORRECEPTORES FRENTE AL ESTRES OXIDATIVO (TUSON ET AL,, MOL VIS 15:168¿180, 2009), PROPONEMOS DETERMINAR LA CONTRIBUCION DE CERKL A LA PATOLOGIA RETINIANA Y SU INTERRELACION CON EL METABOLISMO DE ESFINGOLIPIDOS Y LA APOPTOSIS CELULAR, PARA IDENTIFICAR EL SUBSTRATO DE ESTE ENZIMA, AUN HOY DESCONOCIDO, SE CARACTERIZARAN Y FRACCIONARAN LOS LIPIDOS DE LA RETINA DE RATAS Y RATONES MODELO Y SE DISEÑARA UN ENSAYO DE ACTIVIDAD ENZIMATICA, SEGUIDAMENTE, ANALIZAREMOS EL EFECTO DE CERKL EN LA REGULACION DE LA TRANSCRIPCION DE GENES DIANA QUE INTERVIENEN EN LA SUPERVIVENCIA CELULAR, EN ESTE CASO, DE FOTORRECEPTORES,EL SEGUNDO OBJETIVO PROPONE IDENTIFICAR NUEVOS GENES RP, PARA ELLO, SE UTILIZARA UN CHIP DE DIAGNOSTICO DISEÑADO POR EL EQUIPO PARA ESTUDIAR UN PANEL DE FAMILIAS RP, SE SELECCIONARAN LAS ADECUADAS PARA UN ANALISIS DE LIGAMIENTO A ESCALA GENOMICA CON MARCADORES SNP EN PLATAFORMAS GENOME-WIDE HUMAN SNP ARRAY 5,0 (AFFYMETRIX) Y ILLUMINA INFINITUM 1, LOS GENOTIPOS Y EL LIGAMIENTO SERAN ANALIZADOS CON LOS PROGRAMAS GENOTYPE CONSOLE SOFTWARE Y MERLIN, DESPUES DE ACOTAR EL LOCUS SE ANALIZARA LA REGION CRITICA Y, UNA VEZ IDENTIFICADO EL GEN RP, SE INICIARAN ESTUDIOS FUNCIONALES A NIVEL MOLECULAR Y CELULAR, EL TERCER OBJETIVO SE CENTRA EN LA CARACTERIZACION INICIAL DE UN RATON TRANSGENICO KNOCKOUT TOTAL CERKL-/-, EL CUAL SERA ANALIZADO EN PROFUNDIDAD EN PROYECTOS POSTERIORES, PROPONEMOS EL ANALISIS FUNCIONAL CON ESTUDIOS IN VIVO EN ESTE ANIMAL MODELO, A NIVEL ANATOMO-PATOLOGICO, ELECTROFISIOLOGICO Y MOLECULAR, EL OBJETIVO FINAL ES LA COMPRENSION LA FUNCION DE CERKL Y SU CONTRIBUCION A LA APOPTOSIS DE LOS FOTORRECEPTORES PARA, EN UN FUTURO, DEFINIR ESTRATEGIAS TERAPEUTICAS EFICACES PARA LAS DISTROFIAS DE RETINA NEURODEGENERATIVAS, RETINOSIS PIGMENTARIA\GENES\RATON KNOCKOUT\NEURODEGENERACION\APOPTOSIS\TERAPIA GENICAver más
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