Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO PRETENDE CONTINUAR LOS ESTUDIOS SOBRE LA FUNCIONALIDAD DE LA TRANSGLUTAMINASA CLOROPLASTICA TGZ, PARTIENDO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS HASTA LA FECHA Y TENIENDO EN CUENTA QUE EXISTE MUY POCA INFORMACION SOBRE LA FUNCION DE ESTOS ENZIMAS (TGASAS) EN PLANTAS, LOS OBJETIVOS GENERALES SE DESARROLLARIAN EN TRES AMBITOS COMPLEMENTARIOS:A- ESTUDIAR LA FUNCION DE TGZ EN LA MODIFICACION DE LA ARQUITECTURA TILACOIDAL DE LOS CLOROPLASTOS, ORIGINADA COMO CONSECUENCIA DE CAMBIOS LUMINICOS SIGNIFICATIVOS O A PARTIR DE LA SOBREXPRESION DEL GEN TGZ, CLONADO EN EL GRUPO, HEMOS ENCONTRADO UNA INTERRELACION ENTRE ACTIVIDAD TGASA Y CONCENTRACION DE POLIAMINAS, QUE ES MODULADA POR LA INTENSIDAD LUMINICA Y ESTA IMPLICADA EN FOTOPROTECCION (PINTO ET AL, 2007), TAMBIEN HEMOS OBSERVADO QUE TGZ SE CO-LOCALIZA CON PROTEINAS ANTENA DEL FOTOSISTEMA II (LHCII) DURANTE EL DESARROLLO DEL CLOROPLASTO (SANTOS ET AL, 2007), FINALMENTE, SABEMOS QUE LA SOBREEXPRESION DE TGZ EN CLOROPLASTOS DE TABACO ORIGINA UN AUMENTO EN EL TAMAÑO DEL GRANA Y CAMBIOS EN LOS PARAMETROS FOTOSINTETICOS, ENTRE ELLOS LOS DE FOTOPROTECCION (IOANNIDIS ET AL, 2008),B- DETERMINAR LA ESTRUCTURA TERCIARIA DE LA TGZ PURA, PARTIENDO DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS A PARTIR DE LA EXPRESION HETEROLOGA (CARVAJAL ET AL, 2007) Y PREVIA LA MEJORA DE LOS SISTEMAS DE PURIFICACION, SE REALIZARAN LOS ENSAYOS ADECUADOS PARA LA CRISTALIZACION DE LA PROTEINA, LOS ESTUDIOS SOBRE LA INTERACCION DEL ENZIMA CON SUS SUSTRATOS Y SOBRE LA ESTRUCTURA TERCIARIA DEL ENZIMA, NOS PERMITIRAN DEFINIR MEJOR SU PAPEL EN EL CLOROPLASTO,C- CLONAR EL GEN DE LA TGASA EN ARROZ, PARTIENDO DE LA SECUENCIA CONOCIDA DE MAIZ TGZ (UNICA TGASA CLONADA EN PLANTAS) Y DEL BANCO DE DATOS DE DNA DE ARROZ (ORYZA SATIVA), SE REALIZARA LA CLONACION POR RT-PCR DEL GEN EN ARROZ, SU CARACTERIZACION Y COMPARACION CON EL GEN DE MAIZ YA CONOCIDO,PARA LA REALIZACION DE ESTOS OBJETIVOS, SE UTILIZARAN PLANTAS TGZ TRANSPLASTOMICAS DE TABACO, TRANSGENICAS DE ARROZ Y PLANTAS DE MAIZ NORMALES, LAS TECNICAS UTILIZADAS, ABARCARIAN LA GENETICA MOLECULAR Y EL ANALISIS DEL PROTEOMA, LA MICROSCOPIA CONFOCAL Y/O ELECTRONICA, PASANDO POR ESTUDIOS BIOQUIMICOS Y DE CINETICA ESPECTROFOTOMETRICA, ADEMAS, SE DISPONE DE LOS SISTEMAS DE CULTIVOS CELULARES EN BIOREACTOR PARA LA OBTENCION DE LA PROTEINA SOBREEXPRESADA, TGZ\FUNCIONALIDAD\TILACOIDES\PROTEOMICA\CRISTALIZACION\CLONAJE