Descripción del proyecto
LA EVOLUCION DIRIGIDA DEL CONSORCIO ENZIMATICO LIGNINOLITICO ESTA LEVANTANDO UNA GRAN EXPECTACION DEBIDO A SU APLICACION POTENCIAL EN DIFERENTES SECTORES BIOTECNOLOGICOS DESDE LA PRODUCCION DE BIOCOMBUSTIBLES A SU USO EN SINTESIS ORGANICA, EN LA NATURALEZA, ESTAS ENZIMAS (PRIMORDIALMENTE LACASAS, PEROXIDASAS Y ENZIMAS SUMINISTRADORAS DE H2O2) SON SECRETADAS POR LOS BASIDIOMICETOS DE PODREDUMBRE BLANCA, QUE PROMUEVEN LA DEGRADACION DE LA LIGNINA A TRAVES DE UN COMPLEJO MECANISMO DE ACCION, EL ESTUDIO DE LAS SINERGIAS E INTERACCIONES EN ESTE VERSATIL CONJUNTO DE ENZIMAS DURANTE LA COMBUSTION DE LA LIGNINA SE HA ENCONTRADO CON NUMEROSOS CUELLOS DE BOTELLA DEBIDO A LA FALTA DE HUESPEDES HETEROLOGOS PARA SU EXPRESION FUNCIONAL Y EVOLUCION DIRIGIDA, NUESTRO LABORATORIO LLEVA DESARROLLANDO DURANTE MAS DE UNA DECADA PLATAFORMAS ROBUSTAS PARA LA EVOLUCION DIRIGIDA DE LACASAS Y PEROXIDASAS LIGNINOLITICAS EN LA LEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE (HTTP://WWW,MIGUELALCALDELAB,COM), ESTE ENFOQUE NOS HA PERMITIDO, POR PRIMERA VEZ, PODER DISEÑAR Y MEJORAR DIFERENTES PROPIEDADES DE INTERES BIOTECNOLOGICO INCLUYENDO NUEVAS ACTIVIDADES Y ESPECIFICIDADES, TERMOESTABILIDADES AUMENTADAS O INCLUSO PROMOVER LA TOLERANCIA EN MEDIOS NO-NATURALES COMO LA SANGRE HUMANA O LOS DISOLVENTES ORGANICOS, EN EL TRANSCURSO DE ESTOS EXPERIMENTOS, HEMOS SIDO TESTIGOS DEL ENORME POTENCIAL QUE OFRECE LA MAQUINARIA CELULAR DE S, CEREVISIAE PARA GENERAR DIVERSIDAD GENETICA, E INCLUSO EL PAPEL FUNDAMENTAL QUE ESTA LEVADURA PUEDE DESEMPEÑAR EN ESTUDIOS DE BIOLOGIA SINTETICA, LA PRESENTE PROPUESTA (DEWRY) ABORDA LA INGENIERIA DEL PRIMER CONSORCIO LIGNINOLITICO ARTIFICIAL EN S, CEREVISIAE MEDIANTE EVOLUCION DIRIGIDA, INCLUYENDO NUEVOS ELEMENTOS VERSATILES QUE DESEMPEÑAN IMPORTANTES FUNCIONES DURANTE LA MINERALIZACION DE LA LIGNINA EN LA NATURALEZA, EN NUESTRO PROYECTO NACIONAL ANTERIOR (EVOFACEL), SE AFRONTO EL DISEÑO DE PEROXIDASAS VERSATILES (VP) Y LACASAS MEDIANTE EVOLUCION DIRIGIDA, EN EL PROYECTO DEWRY, SE INCORPORARAN DOS NUEVOS GENES LIGNINOLITICOS: LA PEROXIGENASA INESPECIFICA (UPO), UNA HEMO-TIOLATO PEROXIDASA CAPAZ DE LLEVAR A CABO REACCIONES DE TRANSFERENCIA DE OXIGENO DE GRAN INTERES COMO LA HIDROXILACION DE ALCANOS O LA EPOXIDACION DE OLEFINAS; Y LA FLAVOPROTEINA ARIL ALCOHOL OXIDASA (AAO) QUE OXIDA UNA AMPLIA VARIEDAD DE ALCOHOLES AROMATICOS LIBERANDO H2O2 COMO SUBPRODUCTO, ESTE ULTIMO ACTUA COMO SUSTRATO OXIDANTE DE LAS PEROXIDASAS/PEROXIGENASAS LIGNINOLITICAS, EN EL TRANSCURSO DEL PROYECTO DEWRY, LAS CAPACIDADES BIOSINTETICAS DE LACASAS, UPO, AAO Y VP SERAN DESARROLLADAS MEDIANTE EVOLUCION DIRIGIDA CON EL FIN DE MEJORAR SUS FUNCIONES CATALITICAS, ADEMAS, SE EVOLUCIONARAN PEROXIDASAS/PEROXIGENASAS ANCESTRALES (RESUCITADAS) POR PRIMERA VEZ IN VITRO Y SE COMPARARAN CON SUS EQUIVALENTES ACTUALES EN CUANTO A SUS ACTIVIDADES LATENTES (PROMISCUAS) Y SUS ESTABILIDADES, LOS MEJORES MUTANTES DEL PROCESO SERAN ENSAMBLADOS IN VIVO MEDIANTE EL EMPLEO DE LA MAQUINARIA DE S, CEREVISIAE PARA CONSTRUIR UNA LEVADURA ARTIFICIAL DE PODREDUMBRE BLANCA (WHITE ROT YEAST, WRY), EL DISEÑO DE ESTE WRY SINTETICO PUEDE REPRESENTAR UN INSTRUMENTO VALIOSO PARA ESTUDIOS DE BIOLOGIA SINTETICA ASI COMO ENCONTRAR APLICACIONES EN LA SINTESIS DE COMPUESTOS QUIMICOS Y LA PRODUCCION DE BIOCOMBUSTIBLES DE SEGUNDA GENERACION (BIOETANOL, BIOBUTANOL) A PARTIR DE MATERIAL LIGNOCELULOSICO,PROPUESTA DE INVESTIGACION EXPRESAMENTE AVALADA POR REPSOL S,A, Y NOVOZYMES, INGENIERÍA DE PROTEÍNAS\ EVOLUCIÓN MOLECULAR DIRIGIDA\ RESURRECCIÓN ANCESTRAL\ BIOCOMBUSTIBLES\ LEVADURA DE PODREDUMBRE BLANCA\ LACASA\ PEROXIDASA VERSÁTIL\ PEROXIGENASA INESPECÍFICA\ ARIL ALCOHOL OXIDASA\ LIGNINA