Descripción del proyecto
LAS TECNICAS ESPERMATOLOGICAS HAN MEJORADO LA CRIA DE ANIMALES DOMESTICOS, PERMITIENDO LA CREACION DE BANCOS DE SEMEN PARA PRESERVAR ESPECIES Y RAZAS, NO OBSTANTE, EL ADN ESPERMATICO PUEDE DAÑARSE, REDUCIENDO LA FERTILIDAD, CAUSANDO ABORTOS Y AFECTANDO A LA DESCENDENCIA, PROPONEMOS ESTUDIAR EL ESPERMATOZOIDE DE RUMIANTE, UN GRUPO DE GRAN IMPORTANCIA ECONOMICA, LAS TECNICAS DE REPRODUCCION ARTIFICIAL SON RUTINARIAS EN BOVINO, PERO AUN ESTAN EN DESARROLLO EN OTRAS ESPECIES, EN AMBOS CASOS, ES CRUCIAL MANTENER LA INTEGRIDAD DEL ADN DURANTE LA MANIPULACION DEL SEMEN, SU ALMACENAMIENTO O EN LAS TECNICAS IN VITRO, HACE MAS DE 30 AÑOS QUE SE REALIZAN ANALISIS DEL ADN ESPERMATICO, PERO APENAS SE HA ABORDADO UN ANALISIS ESPECIFICO DE LOS DAÑOS, EL ADN EN EL ESPERMATOZOIDE DE MAMIFERO ESTA ASOCIADO A PROTAMINAS (PDNA) E HISTONAS (HDNA), UN TIPO DE ORGANIZACION CON POSIBLES EFECTOS EPIGENETICOS, EL HDNA INCLUYE SECUENCIAS IMPORTANTES (TELOMEROS Y GENES DEL DESARROLLO TEMPRANO), Y PUEDEN SER MAS VULNERABLES, RESALTANDO LA IMPORTANCIA DE UN ANALISIS ESPECIFICO, ASIMISMO, LAS VIAS APOPTOTICAS PODRIAN CAUSAR DAÑOS EN EL ADN, LA ACTIVACION DE CASPASAS HA SIDO CONFIRMADA EN ESPERMATOZOIDES DE VARIAS ESPECIES, PERO RECIENTEMENTE SE HA PROPUESTO LA POLI(ADP-RIBOSA) POLIMERASA (PARP), DETECTADA EN EL SEMEN HUMANO, COMO UN NUEVO INDICADOR APOPTOTICO, PARP PODRIA ESTAR VINCULADA A FALLOS DE LA ESPERMATOGENESIS O A LA ACTIVACION DE LAS VIAS APOPTOTICAS, Y PODRIA INDICAR DAÑO EN EL ADN,PROPONEMOS UTILIZAR TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR EN ESPERMATOZOIDES DE RUMIANTES (TORO, CARNERO, MACHO CABRIO Y CIERVO IBERICO) PARA A) REALIZAR UN ANALISIS ESPECIFICO DE VARIAS SECUENCIAS DE ADN Y TELOMEROS, DETECTANDO DAÑOS Y DISTINGUIENDO ENTRE SECUENCIAS HDNA Y PDNA, B) DETECTAR PARP Y SU FORMA PROTEOLIZADA (CPARP), COMO INDICADOR DE APOPTOSIS Y DE DAÑO EN ADN, LA MAYORIA DE LOS TRABAJOS PREVIOS HAN UTILIZADO SEMEN HUMANO, POR LO QUE PRIMERAMENTE COMPROBAREMOS LA ASOCIACION DE LAS SECUENCIAS DE ADN A ZONAS RICAS EN HISTONAS, ASI COMO LA PRESENCIA DE LA PARP EN ESPERMATOZOIDES DE RUMIANTES, EVALUAREMOS EL IMPACTO DE VARIOS TIPOS DE ESTRES Y PROTECTORES, PARA COMPROBAR SU EFECTO EN LOS DAÑOS EN HDNA, PDNA Y TELOMEROS, Y EN LA PROTEOLISIS DE PARP, TAMBIEN EVALUAREMOS DOSIS DE MACHOS DE FERTILIDAD PROBADA O DESCARTADOS DE PROGRAMAS DE SELECCION, DETERMINANDO DIFERENCIAS EN EL GRADO Y TIPO DE DAÑO EN EL ADN Y PRESENCIA DE PARP (UNA APLICACION PRACTICAS DE ESTE PROYECTO), COMPROBAREMOS SI LA PRESENCIA DE LA PARP Y CPARP ESTAN RELACIONADAS CON LOS DAÑOS EN ADN EVALUADOS POR QPCR, DETERMINANDO SI PARP PARTICIPA EN LA INDUCCION DE TALES DAÑOS, POR ULTIMO, EVALUAREMOS DOSIS DE UN BANCO DE GERMOPLASMA (TORO, CARNERO Y MACHO CABRIO), CON DATOS DE FERTILIDAD, ESTUDIANDO EL IMPACTO DE LOS DAÑOS DEL ADN EN LA FERTILIDAD, Y LA EFECTIVIDAD DE PARP COMO MARCADOR DE FERTILIDAD,LA APORTACION DE ESTE PROYECTO PODRIA SER ALTAMENTE VALIOSA, NO SOLO MEJORARIA CONSIDERABLEMENTE LA COMPRENSION DEL DESARROLLO DE DAÑOS EN EL ADN Y PROCESOS APOPTOTICOS EN ESPERMATOZOIDES DE ESPECIES NO HUMANAS, TAMBIEN TENDRIA APLICACION EN LA MEJORA DE LA CRIA DE RUMIANTES, EL USO DE PARP COMO UN NUEVO MARCADOR DE CALIDAD ESPERMATICA PODRIA MEJORAR EL DIAGNOSTICO Y PRONOSTICO DE LAS DOSIS SEMINALES, ADEMAS, EL ESTUDIO DE DAÑOS EN EL ADN MEDIANTE QPCR, DISCRIMINANDO ENTRE REGIONES MAS O MENOS VULNERABLES, PODRIA MEJORAR LAS TECNICAS ESPERMATOLOGICAS Y LOS RESULTADOS DE LAS TECNICAS REPRODUCTIVAS IN VITRO,