Descripción del proyecto
EL SUBPROYECTO DESARROLLADO POR EL GRUPO DE INVESTIGACION DE LA UNIVERSIDAD DE LEON (ULE) TIENE POR OBJETO EL ESTUDIO GENETICO Y LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE LA RUTAS CATABOLICAS RESPONSABLES DE LA ASIMILACION DEL ACIDO DESOXICOLICO Y DE OTROS ESTEROIDES (LOS ACIDOS COLICO, LITOCOLICO, QUENODESOXICOLICO, URSOCOLICO, COLANICO Y COMPUESTOS ESTRUCTURALMENTE RELACIONADOS) EN PSEUDOMONAS PUTIDA DOC21, A LO LARGO DEL MISMO SE PRETENDE COMPLETAR LA SECUENCIACION DEL GENOMA DE ESA BACTERIA (INICIADO YA EN EL PROYECTO ANTERIOR) Y LOCALIZAR LOS GENES QUE CODIFICAN LAS ENZIMAS QUE CONSTITUYEN LAS DIFERENTES RUTAS CATABOLICAS IMPLICADAS EN LA DEGRADACION DE CADA UNO DE ESOS COMPUESTOS, EN EL MOMENTO ACTUAL DISPONEMOS DE LA EXPERIENCIA, TECNOLOGIA Y DEL MATERIAL BIOLOGICO NECESARIO (MUTANTES GENERALES Y OTROS ESPECIFICAMENTE AFECTADOS EN LA DEGRADACION DE VARIOS DE ESOS COMPUESTOS, CEPAS RECOMBINANTES, PLASMIDOS, VECTORES, ETC,) COMO PARA ABORDAR EL PROYECTO CON GARANTIAS DE EXITO, LA IDENTIFICACION DE CADA UNO DE LOS GENES MUTADOS NOS SERVIRA PARA ESTABLECER LA NATURALEZA Y FUNCION DE LA PROTEINA CODIFICADA, Y SU LOCALIZACION DENTRO DEL GENOMA NOS PERMITIRA ABORDAR EL ESTUDIO DE SU ORGANIZACION FUNCIONAL, EL GEN AFECTADO, ASI COMO AQUELLOS OTROS ADYACENTES QUE SE TRANSCRIBAN EN EL MISMO SENTIDO, SERAN CLONADOS AISLADAMENTE Y/O EN TANDEM Y, EN UNA PRIMERA ETAPA, SE ANALIZARA SU EXPRESION EN TRANS ESTABLECIENDO LOS GENES REQUERIDOS PARA REVERTIR LA MUTACION PROVOCADA, ESTA INFORMACION SERA MUY IMPORTANTE PARA ESTABLECER EL PAPEL FUNCIONAL JUGADO POR LAS PROTEINAS CODIFICADAS POR LOS DIFERENTES GENES QUE COMPONGAN CADA UNO DE LOS LOCI IDENTIFICADOS, ADICIONALMENTE, SE ABORDARA EL ESTUDIO DE LOS POSIBLES REGULADORES, ASI COMO SU MECANISMO DE ACCION, CON EL FIN DE ENTENDER COMO SE COORDINAN LOS FLUJOS METABOLICOS A TRAVES DE LAS RUTAS COMUNES Y/O DE LAS ESPECIFICAS, CON TODOS LOS DATOS RECOGIDOS ELABORAREMOS MAPAS METABOLICOS EN LOS QUE INCLUIREMOS LAS DIFERENTES RUTAS ANALIZADAS CON EL FIN DE ESTABLECER UNA UNIDAD CATABOLICA FUNCIONAL GLOBAL EN LA QUE PODAMOS INTEGRAR TODOS LOS RESULTADOS OBTENIDOS (INTERMEDIARIOS METABOLICOS COMUNES, RUTAS ESPECIFICAS, REGULADORES GENERALES, ETC,) (CATABOLON), FINALMENTE, MEDIANTE INGENIERIA GENETICA CONSTRUIREMOS UNIDADES DISCRETAS QUE PERMITAN DEGRADAR A OTROS MICROORGANISMOS ALGUNOS DE ESTOS COMPUESTO O BIEN CIERTAS FAMILIAS DE COMPUESTOS, ADICIONALMENTE, OBTENDREMOS A PARTIR DE RHODOCOCCUS O DE MYCOBACTERIUM (VER ACTIVIDADES DE OTROS GRUPOS DENTRO DE ESTE PROYECTO COORDINADO) LOS GENES RESPONSABLES DE LA FUNCIONALIZACION DE LA CADENA LATERAL DEL COLESTEROL Y LOS EXPRESAREMOS EN P, PUTIDA DOC21 CON OBJETO DE ESTABLECER SI ESA CEPA RECOMBINANTE PUEDE AHORA CRECER EN MEDIOS DE COMPOSICION DEFINIDA QUE POSEAN COLESTEROL COMO UNICA FUENTE DE CARBONO, FINALMENTE, SE ANALIZARA LA IMPORTANCIA FARMACOLOGICA DE LOS INTERMEDIARIOS METABOLICOS ACUMULADOS POR LOS DIFERENTES MUTANTES Y, SI FUERA PRECISO, SE PROCEDERA A SU PRODUCCION EN FERMENTADOR (A ESCALA PILOTO O A ESCALA INDUSTRIAL), COLESTEROL\ACIDO DESOXICOLICO\ESTEROIDES\BIODEGRADACION\METABOLISMO\BACTERIA\CATABOLON\GENETICA\GENOMICA