Descripción del proyecto
EL ENSAMBLAJE Y LA MADURACION DE LOS VIRUS TIENEN LUGAR A TRAVES DE UNA CADENA DE PROCESOS CONCERTADOS, DONDE DIFERENTES COMPLEJOS MACROMOLECULARES DESEMPEÑAN FUNCIONES ESPECIFICAS CON ALTA EFICIENCIA, LOS VIRUS DE ADN DE DOBLE CADENA SON LOS SERES VIVOS MAS ABUNDANTES, ENTRE ELLOS, LOS FAGOS CON COLA REPRESENTAN UN CASO EXTREMO DE LA OPTIMIZACION DEL PROCESO INFECCIOSO, EL EMPAQUETAMIENTO DEL ADN, SU ALMACENAMIENTO Y SU EYECCION CONTROLADA SE LLEVAN A CABO MEDIANTE LA ACCION DE COMPLEJOS DE PROTEINAS VIRALES (CONECTOR, TERMINASA, CORE Y COLA), QUE ACTUAN DE MANERA COORDINADA COMO MAQUINARIAS MOLECULARES, EL PROYECTO CONSISTIRA EN CARACTERIZAR ESTOS COMPLEJOS CORRELACIONANDO ESTUDIOS ESTRUCTURALES Y FISICO-QUIMICOS PARA DETERMINAR SUS PROPIEDADES A ESCALA NANOMETRICA, NUESTRA APROXIMACION SERA LA COMBINACION DE CRIO-MICROSCOPIA ELECTRONICA Y TOMOGRAFIA PARA OBTENER LA RECONSTRUCCION TRIDIMENSIONAL DE LOS COMPLEJOS AISLADOS, CON EL FIN DE OBTENER LAS ESTRUCTURAS ATOMICAS DE LOS MISMOS UTILIZAREMOS LOS ULTIMOS AVANCES EN MICROSCOPIA ELECTRONICA O BIEN LA DETERMINACION DE LAS ESTRUCTURAS ATOMICAS DE SUS COMPONENTES AISLADOS OBTENIDAS MEDIANTE CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X, SEGUIREMOS UN PROCESO SISTEMATICO DE PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE CADA UNO DE LOS COMPONENTES ESTRUCTURALES DE LOS DISTINTOS COMPLEJOS, QUE SE UTILIZARAN A CONTINUACION PARA EL ENSAMBLAJE DE COMPLEJOS PARCIALES HASTA LA OBTENCION DE LAS ESTRUCTURAS VIRALES FINALES, LA COMPARACION DE LOS COMPLEJOS INTERMEDIARIOS OBTENIDOS DARA LAS CLAVES SOBRE EL CONTROL DEL ENSAMBLAJE Y LA MADURACION DE ESTAS NANOMAQUINAS, Y PERMITIRA COMPARARLOS CON OTROS HOMOLOGOS DE BACTERIAS Y CELULAS EUCARIOTAS CON EL FIN DE ENCONTRAR MOTIVOS ESTRUCTURALES COMUNES CAPACES DE LLEVAR A CABO FUNCIONES SIMILARES (COMO EL TRANSPORTE DE ADN ENTRE DIFERENTES COMPARTIMENTOS O LA SECRECION DE PROTEINAS), ALGUNAS DE ESTAS NANOMAQUINAS, PRINCIPALMENTE EL CONECTOR Y EL MOTOR DE EMPAQUETAMIENTO, SE USARAN PARA SU MONTAJE EN ENTORNOS SINTETICOS UTILIZANDO MEMBRANAS Y VESICULAS LIPIDICAS, POR OTRA PARTE, LA GENERACION DE PROTEOLIPOSOMAS QUE CONTENGAN POROS FORMADOS POR LOS DIFERENTES COMPLEJOS VIRALES (CONECTOR Y/O CORE Y COLA) PERMITIRA ESTUDIAR LOS FUNDAMENTOS FISICOS NECESARIOS PARA SU FORMACION EN UN SISTEMA EXPERIMENTAL SINTETICO, EL ANALISIS DE MOLECULAS INDIVIDUALES CON TRAMPAS OPTICAS UTILIZANDO ESTAS CONSTRUCCIONES PERMITIRA EL ESTUDIO DE LAS BASES MOLECULARES DE LA TRANSLOCACION DEL ADN A TRAVES DE POROS Y LA UTILIZACION DE ESTOS VEHICULOS PARA LA ENTREGA DIRIGIDA DE ADN, LA CARACTERIZACION ESTRUCTURAL DE ESTAS VESICULAS SINTETICAS SE LLEVARA A CABO MEDIANTE METODOS MEJORADOS DE CORRELACION ENTRE TOMOGRAFIA DE ELECTRONES Y DE RAYOS X DE BAJA ENERGIA (SOFT X-RAYS), COMBINADOS CON METODOS HIBRIDOS PARA INTEGRAR EN LAS RECONSTRUCCIONES TOMOGRAFICAS LOS DATOS DE LOS COMPLEJOS AISLADOS OBTENIDOS POR CRIO-MICROSCOPIA ELECTRONICA, LA INTEGRACION DE LOS DATOS ESTRUCTURALES CON LAS PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS Y FUNCIONALES OBTENIDAS PROPORCIONARA LOS CONOCIMIENTOS FUNDAMENTALES PARA LA CONSTRUCCION A NIVEL NANOSCOPICO DE NUEVAS MAQUINARIAS SINTETICAS, ENSAMBLAJE VIRAL\NANOMÁQUINAS\MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA CORRELATIVA\CRIO-TOMOGRAFÍA\MANIPULACIÓN DE MOLECULAS INDIVIDUALES.