Descripción del proyecto
EL SINDROME REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO PORCINO (PRRS) CAUSA GRAVES PERDIDAS ECONOMICAS A NIVEL MUNDIAL AL SECTOR PORCINO, ESTA ENFERMEDAD ESTA CAUSADA POR EL VIRUS DEL PRRS (PRRSV), CUYA CELULA DIANA ES EL MACROFAGO ALVEOLAR PORCINO (PAM), QUE SE CARACTERIZA POR EXPRESAR NIVELES ELEVADOS DE LA MOLECULA CD163, CONSIDERADA EL PRINCIPAL RECEPTOR DE ESTE VIRUS, EL PRRSV PRESENTA DOS GENOTIPOS BIEN DIFERENCIADOS (RECIENTEMENTE PROPUESTOS COMO DOS VIRUS DIFERENTES): EL TIPO 1 O EUROPEO (PRRSV-1) Y EL TIPO 2 O NORTE AMERICANO (PRRSV-2), LA VARIABILIDAD ANTIGENICA Y GENETICA ENTRE AMBOS GENOTIPOS Y SU CAPACIDAD PARA ALTERAR LA RESPUESTA INMUNE, CONDUCEN A LA FALTA DE EFICACIA DE LA VACUNACION FRENTE AL VIRUS, LA EMERGENCIA DE CEPAS ALTAMENTE PATOGENAS (HP-PRRSV) EN CHINA Y EUROPA DEL ESTE HA AUMENTADO EL INTERES EN ELUCIDAR LOS MECANISMOS POR LOS QUE ESTAS CEPAS EJERCEN SU VIRULENCIA, EL CONTINUO AVANCE DE LOS SISTEMAS DE SECUENCIACION DEL TRANSCRIPTOMA PROPORCIONA UNA AMPLIA BASE PARA MEJORAR LA COMPRENSION DE LA PATOGENIA DE ESTA ENFERMEDAD Y EN ESPECIAL DE LAS CEPAS ALTAMENTE PATOGENAS DEL VIRUS, AUNQUE LAS APROXIMACIONES REALIZADAS HASTA EL MOMENTO HAN PERMITIDO AVANZAR EN EL CONOCIMIENTO SOBRE LA INTERACCION DE LAS DISTINTAS CEPAS DEL VIRUS CON EL PAM COMO CELULA DIANA DEL PRRSV, AUN NO SE HAN LLEVADO A CABO ESTUDIOS IN VIVO QUE HAYAN PERMITIDO ESTUDIAR LAS MODIFICACIONES EN TRANSCRIPTOMA COMPLETO DE LOS PAMS EN EL TRANSCURSO DE LA INFECCION CON CEPAS DE DISTINTA VIRULENCIA DEL PRRSV, LO QUE PERMITIRIA CONOCER COMO SE PRODUCEN ESTAS MODIFICACIONES EN LAS CELULAS DIANA CONSIDERANDO EL MICRO-ENTORNO EN EL QUE SE DESARROLLA LA INFECCION,PARA LLEVAR A CABO ESTE ESTUDIO SE UTILIZARAN UN TOTAL DE 65 LECHONES DE 4 SEMANAS DE EDAD Y LIBRES DEL PRRSV, QUE SE DISTRIBUIRAN ALEATORIAMENTE EN UN GRUPO CONTROL (15 ANIMALES), Y EN DOS GRUPOS INFECTADOS (25 ANIMALES CADA UNO) QUE SERAN INOCULADOS POR VIA INTRANASAL CON LA CEPA 3262 (MODERADA VIRULENCIA) O CON LA CEPA ALTAMENTE PATOGENA LENA, LOS ANIMALES SERAN MONITORIZADOS CLINICAMENTE Y SE SACRIFICARAN A LOS 1, 3, 5, 7 Y 30 DIAS POST-INOCULACION, EN CADA FECHA SE LLEVARAN A CABO LAVADOS BRONCOALVEOLARES, SE ESTUDIARA LA VIABLIDAD Y TASA DE INFECCION POR EL PRRSV DE LAS CELULAS OBTENIDAS Y SE PROCEDERA AL AISLAMIENTO DE CELULAS CD163+, A CONTINUACION SE AISLARA EL ARNM DE ESTAS CELULAS Y SE PROCEDERA A SU SECUENCIACION CON RNASEQ, LOS RESULTADOS DEL ESTUDIO DE SECUENCIACION SERAN CONFIRMADOS POR QPCR Y SE PROCEDERA AL ESTUDIO DE LA EXPRESION DE AQUELLOS MARCADORES IDENTIFICADOS COMO DE MAYOR INTERES EN EL ESTUDIO DE SECUENCIACION MEDIANTE TECNICAS DE QPCR E INMUNOHISTOQUIMICA EN ORGANOS LINFOIDES PRIMARIOS (TIMO) Y SECUNDARIOS (TONSILA, NODULOS LINFATICOS Y BAZO) RECOGIDOS DURANTE LA NECROPSIA, EN ESTE PROYECTO SE ESTUDIA LA INTERACCION HOSPEDADOR-PATOGENO A TRAVES DEL ESTUDIO DEL TRANSCRIPTOMA COMPLETO DE LOS PAMS TRAS UNA INFECCION IN VIVO CON CEPAS DEL PRRSV DE DISTINTA VIRULENCIA, NUESTRA APROXIMACION PERMITIRA LA IDENTIFICACION DE MOLECULAS CLAVE EN LA RESPUESTA DEL PAM A LO LARGO DE LA INFECCION CON EL PRRSV LO QUE APORTARA INFORMACION MUY VALIOSA PARA EL DISEÑO DE NUEVAS HERRAMIENTAS DE CONTROL, PRRSV-1\HP-PRRSV\PAMS\CÉLULA DIANA\TRANSCRIPTOMA\RNASEQ