Descripción del proyecto
EL OBJETIVO FUNDAMENTAL DEL PRESENTE PROYECTO CONSISTE EN LA IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE LIPIDOS NITRADOS (NITROLIPIDOMA) EN PLANTAS SUPERIORES EN SITUACIONES DE ESTRES ABIOTICO, ASI COMO DE SUS DIANAS ENDOGENAS CELULARES DE NITRACION (NITROPROTEOMA) Y S-NITROSILACION.EL OXIDO NITRICO (NO) Y LAS ESPECIES DE NITROGENO REACTIVO (RNS) SON MOLECULAS CLAVE EN LA BIOQUIMICA Y FISIOLOGIA DE PLANTAS SUPERIORES TANTO EN CONDICIONES FISIOLOGICAS COMO DE ESTRES. HASTA EL MOMENTO, LA INVESTIGACION SOBRE NO EN PLANTAS SE HA CENTRADO EN LA IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE DISTINTAS MODIFICACIONES POST-TRANSDUCCIONALES MEDIADAS POR NO, COMO SON LA NITRACION Y LA S-NITROSILACION. DATOS RECIENTES EN LA INVESTIGACION EN CELULAS ANIMALES HAN ESTABLECIDO QUE EL NO PUEDE TAMBIEN AFECTAR A LOS LIPIDOS (LIPIDOS NITRADOS), GENERANDO ESTAS MOLECULAS EFECTOS FISIOLOGICOS Y SEÑALIZADORES MAS POTENTES QUE LOS DEL PROPIO NO. EN BASE A RESULTADOS SOBRE EL METABOLISMO DEL NO EN PLANTAS SUPERIORES OBTENIDOS EN NUESTRO ANTERIOR PROYECTO, LA PRESENTE PROPUESTA SE CENTRARA EN LA IDENTIFICACION DE LOS LIPIDOS NITRADOS EN PLANTAS SUPERIORES (ARABIDOPSIS, GUISANTE, OLIVO Y GIRASOL) Y SU CARACTERIZACION FUNCIONAL BAJO DIFERENTES TIPOS DE ESTRES ABIOTICO DONDE ANTERIORMENTE HEMOS DEMOSTRADO UN PROCESO DE ESTRES NITRO-OXIDATIVO COMO SALINIDAD, METALES PESADOS, TEMPERATURAS EXTREMAS O LESIONES MECANICAS. LOS LIPIDOS NITRADOS SE SEPARARAN E IDENTIFICARAN MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (TLC) Y ESPECTROMETRIA DE MASAS (ESI-MS/MS). LAS DIFERENTES DIANAS MOLECULARES (NITRADAS Y S-NITROSILADAS) DE LIPIDOS NITRADOS EN LAS DIFERENTES CONDICIONES DE ESTRES SERAN ANALIZADAS POR 2D-DIGE (MARCAJE CON CYDYE) Y SERAN IDENTIFICADAS MEDIANTE MALDI-TOF/TOF, NANOLC/MS/MS Y TOF-HPLC. DE FORMA COMPLEMENTARIA, SE PROCEDERA A LA LOCALIZACION CELULAR Y TISULAR DE LAS PROTEINAS NITRADAS Y S-NITROSILADAS EN LOS DIFERENTES ORGANOS (RAIZ, TALLO Y HOJAS) BAJO LAS CONDICIONES DE ESTRES SELECCIONADOS MEDIANTE MICROSCOPIA LASER CONFOCAL (CLSM), UTILIZANDO SONDAS FLUORESCENTES PARA EL NO, RNS Y ANTICUERPOS ESPECIFICOS. POR OTRA PARTE, EL CONTENIDO EN NITROTIROSINA, S-NITROSOGLUTATION (GSNO) Y S-NITROSOTIOLES (SNOS) SE LLEVARA A CABO MEDIANTE LC-TOF/MS, LC-ES/MS Y QUIMIOLUMINISCENCIA DE OZONO (NOA), RESPECTIVAMENTE. POR ULTIMO, CON OBJETO DE OBTENER INFORMACION SOBRE LOS GENES DIANA QUE POTENCIALMENTE PUEDAN VERSE AFECTADOS POR LOS LIPIDOS NITRADOS EN LAS HOJAS Y LAS RAICES DE ARABIDOPSIS, SE LLEVARA A CABO EL ANALISIS TRANSCRIPTOMICO EN PLANTAS DE ARABIDOPSIS TRATADAS CON UNA SELECCION DE LOS LIPIDOS NITRADOS CARACTERIZADOS. ESTOS EXPERIMENTOS SE REALIZARAN MEDIANTE ESTUDIOS DE SECUENCIACION MASIVA UTILIZANDO TECNOLOGIA RNAM-SEQ (ILLUMINA). TODOS ESTOS MECANISMOS SON DESCONOCIDOS EN LAS PLANTAS, Y LOS RESULTADOS OBTENIDOS PODRIAN TENER RELEVANCIA BIOTECNOLOGICA Y AGRONOMICA. EN ESTE SENTIDO, NUTESCA SL ES UNA EMPRESA IMPLICADA EN LA PROTECCION DE LAS PLANTAS QUE APOYAN FIRMEMENTE ESTE PROYECTO, PORQUE YA EN UNO ANTERIOR CONJUNTO FUE POSIBLE EL DESARROLLO DE CINCO PATENTES.