Descripción del proyecto
LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES LA IDENTIFICACION DE GENES CON PATRONES DE EXPRESION ALTERADOS EN EL ENCEFALO DE ANIMALES AFECTADOS DE SCRAPIE, INFECTADOS CON DIFERENTES CEPAS PRIONICAS, EN FASES CLINICAS DISTINTAS DE LA ENFERMEDAD (CLINICA Y PRECLINICA), ASIMISMO, SE ESTUDIARAN PORMENORIZADAMENTE E IN SITU LAS PROTEINAS CODIFICADAS POR LOS GENES ALTERADOS, EN MUESTRAS DE TEJIDOS DE LOS ANIMALES AFECTADOS, ESTE ESTUDIO PERMITIRA CORRELACIONAR LOS RESULTADOS DE LOS ESTUDIOS DE EXPRESION GENICA CON LA LOCALIZACION TISULAR DE LAS PROTEINAS CODIFICADAS POR LOS GENES ALTERADOS COMO CONSECUENCIA DE LAS DIFERENTES CEPAS PRIONICAS QUE PRODUCEN LA ENFERMEDAD DE SCRAPIE EN LOS ANIMALES ESTUDIADOS, ESTAS ALTERACIONES EN LA EXPRESION GENICA, CORROBORADAS POR LOS ESTUDIOS IN SITU, SERAN INDICADORES DE LA ENFERMEDAD, Y PUEDEN SER EXPLOTADOS COMO MARCADORES PARA SU APLICACION EN LA CREACION DE NUEVOS TESTS DE DIAGNOSTICO,SE LLEVARAN A CABO LOS SIGUIENTES ESTUDIOS:- TIPIFICACION DE CEPAS PRIONICAS,- CARACTERIZACION DE LAS POBLACIONES CELULARES NEURALES IMPLICADAS EN LA EXPRESION DE PRPSC Y ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES SINAPTICAS, DE LA MATRIZ EXTRACELULAR, DE LAS AQUAPORINAS, DE LOS FENOMENOS DE ESTRES OXIDATIVO Y DE LOS MECANISMOS BIOQUIMICOS RELACIONADOS CON EL DAÑO Y MUERTE CELULAR EN EL SISTEMA NERVIOSO CENTRAL DE LOS ANIMALES ESTUDIADOS,- ANALISIS DE LAS ALTERACIONES DE LA EXPRESION GENICA RESULTANTE DEL ESTUDIO MEDIANTE EL USO DE CDNA MICROARRAYS DE LOS ANIMALES SELECCIONADOS, ESTE OBJETIVO SE LLEVA A CABO PARA AMPLIAR EL CONOCIMIENTO SOBRE EL PERFIL GENICO ALTERADO EN LOS OVINOS AFECTADOS DE SCRAPIE DE NUESTRO PAIS, LOS RESULTADOS PREVISTOS PROPORCIONARAN INFORMACION SOBRE LOS ASPECTOS PATOGENICOS DE LA ENFERMEDAD, ASI COMO DE POSIBLES NUEVOS MARCADORES GENOMICOS QUE PUEDEN SER UTILIZADOS EN FUTUROS METODOS DE DIAGNOSTICO DE ESTAS ENFERMEDADES, EL ESTUDIO DE LA ALTERACION DE LA EXPRESION GENICA POR C-DNA/OLIGO MICROARRAYS ES UN TRABAJO NOVEDOSO QUE NOS PERMITIRA CONOCER MAYOR CANTIDAD DE PROTEINAS ALTERADAS EN LOS ANIMALES ESTUDIADOS QUE LAS TECNICAS DE ESTUDIO DE EXPRESION GENICA CONVENCIONALES, SE PROCEDERA A LA VALORACION DE LOS CAMBIOS EN LA EXPRESION DE GENES QUE DIFIERAN EN EXPRESION ENTRE ANIMALES INFECTADOS POR DIFERENTES CEPAS PRIONICAS Y CONTROL, ASI COMO EN EL ESTADO CLINICO DE LA ENFERMEDAD, SE PRESTARA ESPECIAL ATENCION A LA SELECCION DE AQUELLOS GENES QUE COINCIDAN CON LOS ALTERADOS EN LA EXPRESION GENICA DE RATONES INOCULADOS CON DIFERENTES CEPAS DE SCRAPIE,SE REALIZARA LA IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS CODIFICADAS POR LOS GENES QUE HAYAN VISTO ALTERADA SU EXPRESION DEBIDO A LA ENFERMEDAD, LAS ALTERACIONES IDENTIFICADAS EN EL ESTUDIO NECESITAN SER EVALUADAS UTILIZANDO TECNICAS INMUNOHISTOQUIMICAS EN LOS DIFERENTES ESTADIOS DE LA ENFERMEDAD PARA DETERMINAR LOS TIPOS CELULARES EN LOS QUE SE PRODUCEN LAS ALTERACIONES, EL PERIODO EN EL QUE ESTAS ALTERACIONES OCURREN, Y SI LA ACUMULACION DE PRPSC SE ASOCIA CON POBLACIONES CELULARES QUE MUESTREN ALTERACIONES EN LA EXPRESION GENICA, ASI, PODREMOS ESTABLECER SI ESAS DIFERENCIAS DEPENDEN DE LA VARIABILIDAD NEUROPATOLOGICA DE LAS PRESENTACIONES CLINICAS (PRESUNTAMENTE CAUSADAS POR LAS DIFERENCIAS ENTRE CEPAS PRIONICAS Y GENOTIPOS), Y SI EXISTEN CLARAS DIFERENCIAS ENTRE LAS ALTERACIONES EN ANIMALES PRECLINICOS Y CLINICOS,