Descripción del proyecto
3DLIVE PROPONE INTEGRAR LA HOLOGRAFIA DIGITAL EN EL MUNDO DE LA NANOSCOPIA OPTICA, PARA ASI ESTUDIAR PROCESOS DINAMICOS DENTRO DE GRANDES VOLUMENES TRIDIMENSIONALES CON PRECISION NANOMETRICA, EL OBJETIVO FINAL ES ESTUDIAR LAS DINAMICAS DEL PROCESO DE INTERNALIZACION CELULAR EN 3D PARA ABORDAR CUESTIONES CLAVE EN EL CONTEXTO DE LA NANOMEDICINA Y EL TRAFICO VESICULAR, ESPECIFICAMENTE DE EXOSOMAS, PARA LOGRAR ESTE OBJETIVO AMBICIOSO, DESARROLLAREMOS TECNICAS DE MICROSCOPIA NOVEDOSAS EN LA HOLOGRAFIA APLICADA TANTO A LA LUZ DISPERSADA DE MANERA ELASTICA (RAYLEIGH SCATTERTING) COMO LA INELASTICA (FLUORESCENCIA Y RAMAN), PARA ELLO, UTILIZAREMOS UN MICROSCOPIO INTERFEROMETRICO 3D, EN MODO FUERA DE EJE (OFF-AXIS), DE ALTA VELOCIDAD QUE VISUALIZA LA DINAMICA DE CELULAS VIVAS A FRECUENCIAS DE IMAGEN >1KHZ, SIMULTANEAMENTE, APROVECHAREMOS LA VERSATILIDAD DE LOS MARCADORES DE RAMAN Y FLUORESCENTES PARA IDENTIFICAR LAS ESTRUCTURAS CELULARES DE INTERES,LA IMPLEMENTACION DE LA HOLOGRAFIA 3D EN CELULAS VIVAS REQUIERE ESTRATEGIAS SOFISTICADAS DE REDUCCION DE FONDO, 3DLIVE SE DESARROLLARA ESCALONADAMENTE IMPLEMENTANDO AVANCES CLAVE HASTA LLEGAR AL OBJETIVO FINAL, APLICAR ESTOS AVANCES DE FORMA ESCALONADA PERMITE LA PUBLICACION DE VARIOS ARTICULOS DE ALTO IMPACTO QUE MITIGAN EL RIESGO ASOCIADO CON LA VISION AMBICIOSA DE 3DLIVE,INICIALMENTE, INVESTIGAREMOS EL ESPECTRO, RESUELTO TANTO EN FASE COMO EN AMPLITUD, DE LA LUZ DISPERSADA POR NANOPARTICULAS METALICAS, ASI COMO DE ESTRUCTURAS PLASMONICAS MAS SOFISTICADAS Y HECHAS A MEDIDA, MAS ALLA DE PERMITIR EL DESARROLLO DE NUEVAS TECNICAS DE ELIMINACION DE FONDO SENSIBLES A LA FASE, LA RESPUESTA DE DICHAS ESTRUCTURAS ES UN TEMA RELATIVAMENTE INEXPLORADO, DESPUES, IMPLEMENTAREMOS ALGORITMOS OPTIMIZADOS Y ROBUSTOS QUE PERMITAN EL SEGUIMIENTO TRIDIMENSIONAL DE PARTICULARES INDIVIDUALES, ESTE SUB-OBJETIVO ESTARA ACOMPAÑANDO CON EL DESARROLLO DE UNA PLATAFORMA HOLOGRAFICA BARATA Y COMERCIALMENTE VIABLE DE "NANOPARTICLE TRACKING ANALYSIS" QUE APLICAREMOS EN LA CARACTERIZACION DIA-A-DIA EN HOSPITALES, ESTOS DOS SUB-OBJETIVOS EN COMBINACION CON OTROS PASOS INNOVADORES COMO EL IGUALAR EL INDICE DE REFRACCION MEDIANTE AGENTES ACLARANTES DE TEJIDOS, PERMITEN LA VISION FINAL DE 3DLIVE: EL SEGUIMIENTO ROBUSTO, TRIDIMENSIONAL Y DE ALTA VELOCIDAD EN CELULAS VIVAS DE NANO-OBJETOS,PARA GARANTIZAR IMAGENES LIBRES DE ARTEFACTOS, INCREMENTAREMOS NUESTRA YA ADQUIRIDA EXPERIENCIA EN TECNICAS DE HOLOGRAFIA 3D BASADAS EN FLUORESCENCIA Y RAMAN, MIENTRAS DESARROLLAMOS ESTOS METODOS, GENERAREMOS MAPAS TRIDIMENSIONALES DE RIGIDEZ INTRACELULAR O GRADIENTES DE PH Y DISTRIBUCIONES DE MOLECULAS BIOLOGICAMENTE RELEVANTES DE UNA SOLA CELULA COMO DE CONJUNTOS DE ELLAS,LA COMBINACION DE TODOS LOS SUB-OBJETIVOS PREVIAMENTE DESCRITOS PERMITE ESTUDIAR LAS DINAMICAS DE INTERNALIZACION DE PARTICULAS EN CELULAS VIVAS CON ALTA RESOLUCION TEMPORAL Y LIBRE DE ARTEFACTOS, 3DLIVE APORTARA INFORMACION CRUCIAL PARA LAS RUTAS DE ESCAPE ENDOSOMALES DE AGENTES TERANOSTICOS HECHOS A MEDIDA Y SERVIRA COMO UNA PLATAFORMA DE OPTIMIZACION PARA EL DESARROLLO DE NUEVAS ESTRATEGIAS DE ESCAPE, 3DLIVE APORTARA INFORMACION PRECISA SOBRE LA MECANICA DE LA INTERNALIZACION DE EXOSOMAS Y SU CAPACIDAD DE OBSERVACION DURANTE UN TIEMPO ILIMITADO SE UTILIZARA PARA SEGUIR EL TRAFICO DE EXOSOMAS DE MANERA INDIVIDUAL A TRAVES DE LAS CELULAS, DESDE SU INTERNALIZACION HASTA SU RE-LIBERACION AL MEDIO EXTRACELULAR EN CONDICIONES QUE IMITAN EL FLUJO SANGUINEO IN VIVO, BIOFÍSICA\HOLOGRAFÍA\CÉLULAS VIVAS\EXOSOMAS\NANOMEDICINA\FLUORESCENCIA\SERS\MICROSCOPIA 3D\MICROSCOPIA ÓPTICA\ÓPTICA