Innovating Works

CTQ2014-56966-R

Financiado
RECONOCIMIENTO DE METILACION EN HISTONA H3 POR EL SUPRESOR TUMORAL ING5.
LAS PROTEINAS DE LA FAMILIA INHIBITORS OF GROWTH (ING1-5) FORMAN PARTE DE COMPLEJOS DE ACETILACION Y DESACETILACION E HISTONAS Y MODULAN LA TRANSCRIPCION GENICA, SON SUPRESORES TUMORALES QUE INHIBEN EL CRECIMIENTO CELULAR E INDUCE... LAS PROTEINAS DE LA FAMILIA INHIBITORS OF GROWTH (ING1-5) FORMAN PARTE DE COMPLEJOS DE ACETILACION Y DESACETILACION E HISTONAS Y MODULAN LA TRANSCRIPCION GENICA, SON SUPRESORES TUMORALES QUE INHIBEN EL CRECIMIENTO CELULAR E INDUCEN APOPTOSIS EN RESPUESTA A DAÑO EN EL ADN,HEMOS CARACTERIZADO LA ESTRUCTURA DE ING4, QUE TIENE UN DOMINIO N-TERMINAL (N-T) CONSERVADO DIMERICO Y CON ESTRUCTURA DE HELICES ENROLLADAS, UNA REGION CENTRAL FLEXIBLE Y UN DOMINIO CONSERVADO C-TERMINAL DE TIPO PLANTHOMEODOMAIN (PHD), EL PHD RECONOCE LA COLA N-T DE HISTONA H3 TRIMETILADA EN LISINA 4 (H3K4ME3) CON AFINIDAD MICROMOLAR, ING4 ES UN “LECTOR” BIVALENTE DE LA MARCA H3K4ME3 DEL “CODIGO DE HISTONAS” Y RECLUTA EL COMPLEJO DE ACETILACION DE HISTONAS HBO1, LO CUAL RESULTA EN ACETILACION DE HISTONA H4 EN LISINA 16,LA PROTEINA HOMOLOGA ING5 TIENE UN PHD QUE RECONOCE H3K4ME3 CON AFINIDAD MICROMOLAR Y TAMBIEN PUEDE FORMAR PARTE DEL COMPLEJO DE ACETILACION DE HISTONAS HBO1, HEMOS DETERMINADO RECIENTEMENTE LA ESTRUCTURA CRISTALINA DE LOS DOMINIOS N-T DE ING4 E ING5 OBSERVANDO QUE ING4 FORMA UN DIMERO SIMETRICO MIENTRAS QUE ING5 FORMA UN DIMERO ASIMETRICO, ESTO ES SORPRENDENTE YA QUE LA IDENTIDAD DE SECUENCIA ES DEL 75%, PERO PUEDE TENER IMPORTANTES IMPLICACIONES FUNCIONALES, SIN EMBARGO, HEMOS PURIFICADO LA PROTEINA ING5 COMPLETA Y PARECE SER MUY SIMILAR A ING4: FORMA UN DIMERO CON UNA REGION FLEXIBLE ENTRE EL DOMINIO DE DIMERIZACION Y EL PHD, HEMOS ANALIZADO UN MUTANTE DEL DOMINIO N-T DE ING5 DETECTADOS EN CANCER CUYO EFECTO EN LA ESTABILIDAD ES MAS CONSISTENTE CON UN DIMERO SIMETRICO QUE CON EL ASIMETRICO OBSERVADO EN EL CRISTAL,PROPONEMOS EVALUAR EXPERIMENTALMENTE LAS SIGUIENTES HIPOTESIS SOBRE LA ESTRUCTURA Y FUNCION DE ING5:1) LA ESTRUCTURA ASIMETRICA DEL DOMINIO N-T DE ING5 ES UN ARTEFACTO DE LA CRISTALIZACION, Y EN DISOLUCION FORMA UN DIMERO SIMETRICO COMO ING4, PARA COMPROBARLO USAREMOS PRINCIPALMENTE DOS VIAS: ASIGNAR EL ESPECTRO DE RMN DEL DOMINIO Y CRISTALIZAR DOS MUTANTES DISEÑADOS PARA ELIMINAR POSIBLES ARTEFACTOS DE CRISTALIZACION,2) DOS MUTACIONES DETECTADAS EN CANCER DEL DOMINIO N-T DE ING5 QUE DESESTABILIZAN FUERTEMENTE LA PROTEINA REDUCIRAN SU ACTIVIDAD DE SUPRESION TUMORAL, MIENTRAS QUE UNA TERCERA MUTACION CASI SIN EFECTO EN LA ESTABILIDAD NO LO HARA, PARA VALIDAR ESTA HIPOTESIS MEDIREMOS LAS CONSTANTES DE DISOCIACION DE LAS PROTEINAS A LA TEMPERATURA FISIOLOGICA Y EVALUAREMOS EL IMPACTO DE LAS MUTACIONES EN LA PROLIFERACION CELULAR Y/O LA INDUCCION DE APOPTOSIS EN RESPUESTA A DAÑO EN EL ADN,3) EL DOMINIO N-T DE ING5 ESTA IMPLICADO EN LA UNION A LA PROTEINA JADE1L, UN COMPONENTE DEL COMPLEJO HBO1, PARA COMPROBARLO ESTUDIAREMOS POR RMN EL SITIO DE UNION DE ING5 AL DOMINIO IIB DE JADE1L,4) LA PROTEINA DIMERICA ING5 PUEDE UNIRSE SIMULTANEAMENTE A LAS DOS COLAS DE HISTONA H3 PRESENTES EN UN NUCLEOSOMA, Y PUEDE UNIRSE TAMBIEN A OTRAS REGIONES DE SU SUPERFICIE, PARA EXPLORAR ESTAS POSIBILIDADES VAMOS A ESTUDIAR LA UNION DE ING5 A ADN Y A NUCLEOSOMAS RECONSTITUIDOS CON LA MODIFICACION H3K4ME3,NUESTRA EXPERIENCIA EN LA PREPARACION DE PROTEINAS ING PARA ANALISIS ESTRUCTURAL, NUESTROS DATOS PRELIMINARES EN RELACION A LAS CUATRO HIPOTESIS, Y NUESTRAS COLABORACIONES CON GRUPOS CUYA EXPERIENCIA COMPLEMENTA LA NUESTRA INDICA QUE EL PROYECTO ES FACTIBLE Y QUE PUEDE DAR LUGAR A RESULTADOS DE ALTO IMPACTO EN EL CAMPO DE ESTRUCTURA DE CROMATINA, METILACION Y ACETILACION DE HISTONAS Y EPIGENETICA DEL CANCER, ING5\HISTONA H3\METILACIÓN\RECONOCIMIENTO MOLECULAR\ACETILACIÓN\RMN\MUTACIÓN\SUPRESOR TUMORAL ver más
01/01/2014
ASOCIACION CENTRO...
174K€
Perfil tecnológico estimado

Línea de financiación: concedida

El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2014-01-01
Presupuesto El presupuesto total del proyecto asciende a 174K€
Líder del proyecto
ASOCIACION CENTRO DE INVESTIGACION COOPERATIV... Actividades de organizaciones profesionales asociacion
Perfil tecnológico TRL 4-5 50K