Descripción del proyecto
LAS LAMINAS SON LAS PRINCIPALES PROTEINAS ESTRUCTURALES DEL NUCLEOESQUELETO (NSK) EN CELULAS ANIMALES QUE REALIZAN FUNCIONES ESENCIALES EN REPLICACION, TRANSCRIPCION Y ORGANIZACION DE CROMATINA EN EL NUCLEO, LAS PLANTAS POSEEN PROTEINAS ANTIGENICAMENTE RELACIONADAS CON LAS LAMINAS ANIMALES Y ADEMAS CONSERVAN LOS MECANISMOS DE TRANSLOCACION DEL RECEPTOR DE LA LAMINA B, PERO LOS GENOMAS VEGETALES CARECEN DE ORTOLOGOS DE LAMINAS Y DE SUS PROTEINAS ASOCIADAS, UNO DE LOS RETOS ACTUALES EN LA INVESTIGACION DEL CAMPO ES LA IDENTIFICACION DE LOS HOMOLOGOS FUNCIONALES DE LAS LAMINAS EN PLANTAS,EN ESTE PROYECTO NOS PROPONEMOS INVESTIGAR LOS MIEMBROS DE LA FAMILIA GENICA LINC DE ARABIDOPSIS CUYAS MUTACIONES, AL IGUAL QUE LAS DE LAS LAMINAS, AFECTAN AL TAMAÑO Y MORFOLOGIA NUCLEAR Y AL NUMERO Y DISTRIBUCION DE LAS MASAS DE HETEROCROMATINA, EXISTEN ORTOLOGOS DE LINC EN VARIAS ESPECIES DE PLANTAS, PERO NO EN MAMIFEROS NI EN LEVADURAS, LAS PROTEINAS LINC TIENEN UNA ESTRUCTURA SECUNDARIA SEMEJANTE A LA DE LAS LAMINAS CON EL DOMINIO DE DIMERIZACION MUY CONSERVADO, AUNQUE NO PRESENTAN SIMILITUD DE SECUENCIA PRIMARIA CON ELLAS, SON SIMILARES A LAS PROTEINAS NMCP DEL NSK DE DAUCUS CAROTA Y PODRIAN CORRESPONDER A PROTEINAS ESPECIFICAS DEL NSK DE PLANTAS, AUNQUE SU PRESENCIA EN EL MISMO NO HA SIDO ANALIZADA, EL OBJETIVO DEL PROYECTO ES CARACTERIZAR LAS PROTEINAS HOMOLOGAS DE LINC/NMCP EN ALLIUM CEPA UNA ESPECIE CUYO CONTENIDO DE DNA ES 115 VECES EL DE ARABIDOPSIS THALIANA Y QUE FORMA PROMINENTES MASA DE HETEROCROMATINA QUE PUEDEN ESTAR IMPLICADAS EN LA EXPRESION ESPACIO-TEMPORAL DEL CODIGO EPIGENETICO, E INVESTIGAR SU PAPEL EN LA ORGANIZACION DEL NUCLEO Y NSK COMO POSIBLES HOMOLOGOS FUNCIONALES DE LAMINAS, PARA ELLO HEMOS OBTENIDO YA EL CDNA DE ACNMCP QUE PRESENTA UN ALTO PORCENTAJE DE IDENTIDAD CON LA PROTEINA NMCP1 DE ORYZA SATIVA Y MENOS CON LAS DE DICOTILEDONEAS,EN EL PROYECTO SE IDENTIFICARAN LAS PROTEINAS ACNMCP MEDIANTE WB E INMUNOPRECIPITACION CON UN ANTICUERPO POLICLONAL (AC5E) QUE HEMOS PRODUCIDO CONTRA UN FRAGMENTO DE LA PROTEINA CODIFICADA POR EL CDNA EXPRESADA EN E,COLI, Y SE CARACTERIZARAN MEDIANTE ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL, SE ANALIZARA SU EXPRESION Y DISTRIBUCION EN CELULAS PROLIFERANTES, QUIESCENTES Y DIFERENCIADAS DE RAIZ; SE INVESTIGARAN CARACTERISTICAS TIPICAS DE LAMINAS COMO SU DISTRIBUCION SUBNUCLEAR MEDIANTE INMUNOMICROSCOPIA CONFOCAL Y ELECTRONICA, SU PRESENCIA EN EL NSK MEDIANTE FRACCIONAMIENTO SUBCELULAR Y EXTRACCION DIFERENCIAL, ASI COMO LAS PROTEINAS ASOCIADAS A ELLAS EN EL NUCLEO Y NSK MEDIANTE CO-INMUNOPRECIPITACION Y CO-LOCALIZACION, SE INVESTIGARA SU INTERACCION CON PROTEINAS ESTRUCTURALES DEL NSK DE ALLIUM CEPA QUE A SU VEZ INTERACCIONAN DIRECTAMENTE CON LAMINAS EN EL NUCLEO ANIMAL, COMO ACTINA Y ESPECTRINA, Y TAMBIEN CON LAS PROTEINAS ESPECIFICAS DE PLANTAS NIFS, EL PAPEL DE LAS PROTEINAS NMCP EN LA ORGANIZACION Y FUNCIONALIDAD NUCLEAR SE INVESTIGARA, EN LOS MUTANTES ATLINC,LA IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION BIOQUIMICA, ULTRAESTRUCTURAL Y FUNCIONAL DE ACNMCP Y DE SUS PROTEINAS ASOCIADAS EN UN SISTEMA VEGETAL (ALLIUM CEPA) CON UNA ORGANIZACION NUCLEAR MUY ADECUADA PARA ESTE TIPO DE ANALISIS Y DIFERENTE DE LA DE LA PLANTA MODELO ARABIDOPSIS, SUPONDRA UN AVANCE SIGNIFICATIVO EN EL CONOCIMIENTO DE LA ORGANIZACION Y FUNCIONALIDAD DEL NUCLEO DE PLANTAS QUE CONTRIBUIRA AL CONOCIMIENTO DE LOS PROCESOS DE EXPRESION GENICA Y SU REGULACION EN PROLIFERACION Y EN EL DESARROLLO DE PLANTAS,