OPTIMIZACION DE METODOLOGIAS ISOTERMICAS DE AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS
LAS TECNOLOGIAS DE AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS SE HAN CONVERTIDO EN HERRAMIENTAS FUNDAMENTALES EN EL DIAGNOSTICO MOLECULAR, DEBIDO A SU CAPACIDAD PARA DETECTAR PEQUEÑAS CANTIDADES DE MOLECULAS DIANA, PERO TAMBIEN PARA LA MED...
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Descripción del proyecto
LAS TECNOLOGIAS DE AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS SE HAN CONVERTIDO EN HERRAMIENTAS FUNDAMENTALES EN EL DIAGNOSTICO MOLECULAR, DEBIDO A SU CAPACIDAD PARA DETECTAR PEQUEÑAS CANTIDADES DE MOLECULAS DIANA, PERO TAMBIEN PARA LA MEDICINA PERSONALIZADA, YA QUE CON ALGUNAS DE ELLAS SE PUEDEN GENERAR GRANDES CANTIDADES DE DNA SINTETICO DE GRADO GMP PARA SER UTILIZADO EN TERAPIA GENICA O EN LA PRODUCCION DE VACUNAS. EL PROYECTO PRESENTADO TIENE COMO OBJETIVO MEJORAR LA AMPLIFICACION ISOTERMICA DE ACIDOS NUCLEICOS, YA SEA REFINANDO LOS METODOS EXISTENTES O DESARROLLANDO METODOS NOVEDOSOS QUE EXPLOTEN LAS PROPIEDADES EXCEPCIONALES DE LA DNA POLIMERASA DEL FAGO PHI29 (PHI29 DNAPOL), UN PARADIGMA PARA LA AMPLIFICACION DEPENDIENTE DE DESPLAZAMIENTO DE CADENA. PARA ELLO, SE UTILIZARA UNA VERSION MEJORADA DE PHI29 DNAPOL (QUALIPHI) A LO LARGO DE ESTE PROYECTO, COMO POR EJEMPLO, PARA DESARROLLAR UN NUEVO METODO DE DETECCION DE SARS-COV2 BASADO EN SONDAS CANDADO AMPLIFICADAS POR CIRCULO ROTATORIO (RCA) Y DETECTADAS POR BALIZAS MOLECULARES O POR CRISPR-CAS12A. EL PROYECTO TIENE TAMBIEN UNA VERTIENTE DE BIOLOGIA MOLECULAR, EN LA QUE EXPLORAREMOS LAS PROPIEDADES ENZIMATICAS Y LA COMPETENCIA IN VIVO DE ALGUNAS VARIANTES TUMORALES O POLIMORFISMOS NATURALES DE LA PRIMPOL HUMANA, DESCUBIERTA Y ESTUDIADA EN NUESTRO LABORATORIO DURANTE LOS ULTIMOS 10 AÑOS, PARA PROBAR ASI SU UTILIDAD COMO MARCADORES DE PRONOSTICO EN EL CANCER Y TAMBIEN COMO HERRAMIENTAS VALIDAS EN LOS METODOS DE AMPLIFICACION DEPENDIENTES DE PRIMASA. UNO DE ESTOS METODOS, TRUEPRIME, DESARROLLADO EN NUESTRO LABORATORIO EN COLABORACION CON SYGNIS AG, UTILIZA UNA PRIMPOL BACTERIANA PARA GENERAR LOS DNA PRIMERS NECESARIOS PARA PHI29 DNAPOL. EN ESTE PROYECTO, SE CARACTERIZARAN Y PROBARAN OTRAS PRIMPOL DE DIFERENTES ORIGENES PARA OPTIMIZAR TRUEPRIME, Y TAMBIEN SE EXPLORARA LA CAPACIDAD INUSUAL DE TTHPRIMPOL PARA FABRICAR PRIMERS EN UN MOLDE DE DOBLE CADENA DE DNA. OTRO OBJETIVO IMPORTANTE DE ESTE PROYECTO PERSIGUE EXPLOTAR LA CAPACIDAD DE LAS VERSIONES NATURALES O MODIFICADAS DE PRIMPOL PARA PRODUCIR PRIMERS SOBRE RNA, Y DESARROLLAR LA NOVEDOSA SOLUCION DE PROPORCIONAR PRE-PRIMERS SINTETICOS MUY CORTOS PARA CEBAR LA SINTESIS DE PRIMERS DE DNA MADUROS, SOBRE UN MOLDE DE RNA. ADEMAS, DIFERENTES REVERSO-TRANSCRIPTASAS (RTS) SERAN ESTUDIADAS COMPARATIVAMENTE, PROBANDO SU COMPATIBILIDAD CON AQUELLAS PRIMPOLS CAPACES DE PRIMAR SOBRE RNA, Y TAMBIEN SU CAPACIDAD PARA LLEVAR A CABO LA REVERSO-TRANSCRIPCION ACOPLADA AL DESPLAZAMIENTO DE HEBRAS DE CDNA NACIENTE. FINALMENTE, SE REALIZARA LA FUSION DEL MODULO PRIMPOL, TANTO A RT COMO A QUALIPHI PARA OBTENER ENZIMAS QUIMERICAS CAPACES DE INICIAR LA SINTESIS. ESTAMOS SEGUROS DE QUE TODOS ESTOS ESTUDIOS CONVERGERAN EN EL DESARROLLO DE UN NUEVO METODO, QUE DENOMINAREMOS PRIMPOL-PRIMEDRT-TRUEPRIME, PARA LA AMPLIFICACION DEL TRANSCRIPTOMA O CUALQUIER OTRO RNA DE INTERES. NA POLIMERASA\VARIANTES TUMORALES\PROTEINAS QUIMERICAS\REVERSO-TRANSCRIPTASAS\AMPLIFICACION ISOTERMICA\PRIMPOL\DNA PRIMASA
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