Descripción del proyecto
LOS ESTEROIDES ANABOLIZANTES (AAS) SON EL GRUPO DE SUSTANCIAS PROHIBIDAS EN EL DEPORTE MAS DETECTADO EN LOS ANALISIS DE CONTROL DE DOPAJE, LO QUE REFLEJA EL AMPLIO USO DE ESTAS SUSTANCIAS POR LOS ATLETAS. POR ESTA RAZON, ES NECESARIO ESTUDIAR DIFERENTES ESTRATEGIAS PARA MEJORAR LA DETECCION DEL ABUSO DE AAS.LOS ESTUDIOS DEL METABOLISMO DE FASE II DE AAS SE HAN REALIZADO TRADICIONALMENTE MEDIANTE CROMATOGRAFIA DE GASES-ESPECTROMETRIA DE MASAS (GC-MS), UTILIZANDO UNA HIDROLISIS PREVIA DE LA ORINA CON ENZIMAS CON ACTIVIDAD β-GLUCURONIDASA. POR ESTA RAZON, UNICAMENTE LOS METABOLITOS CONJUGADOS CON ACIDO GLUCURONICO E HIDROLIZABLES EN ESAS CONDICIONES HAN SIDO SISTEMATICAMENTE ESTUDIADOS. ESTUDIOS RECIENTES SOBRE EL METABOLISMO DE ESTEROIDES USANDO CROMATOGRAFIA LIQUIDA-ESPECTROMETRIA DE MASAS EN TANDEM (LC-MS/MS) HAN DEMOSTRADO LA EXISTENCIA NUEVOS METABOLITOS DE FASE I Y DE FASE II DE LARGA EXCRECION PARA ESTEROIDES ANABOLIZANTES ENDOGENOS Y EXOGENOS. ESTOS DATOS DEMUESTRAN QUE AL MENOS UNA PARTE DEL METABOLISMO DE AAS NO HA SIDO ESTUDIADO DE FORMA EXHAUSTIVA UTILIZANDO LAS HERRAMIENTAS ANALITICAS ADECUADAS (POR EJEMPLO, LC-MS/MS).LA HIPOTESIS DEL PROYECTO ES QUE OTROS METABOLITOS DE FASE II SON UNA PARTE IMPORTANTE DEL PERFIL METABOLICO DE AAS. LA HIPOTESIS SE BASA EN QUE PARA MUCHOS AAS SE DESCONOCE GRAN PARTE DE SU METABOLISMO, EN QUE ESTUDIOS RECIENTES SOBRE EL METABOLISMO DE TESTOSTERONA HAN DEMOSTRADO LA EXISTENCIA DE METABOLITOS CONJUGADOS CON ACIDO GLUCURONICO ESTABLES A LA HIDROLISIS URINARIA CON β-GLUCURONIDASAS, Y EN QUE LA FORMACION DE BIS-GLUCURONIDOS, DI-GLUCURONIDOS Y BIS-CONJUGADOS HA SIDO DESCRITA PARA DIVERSOS COMPUESTOS. EL OBJETIVO DEL PROYECTO ES ESTUDIAR NUEVOS METABOLITOS CONJUGADOIS DE AAS, INCLUYENDO MONOGLUCURONIDOS RESISTENTES A LA HIDROLISIS EN ORINA CON β-GLUCURONIDASAS, BIS- Y DI-GLUCURONIDOS, Y BIS-CONJUGADOS. SI ESTOS METABOLITOS FUERAN EXCRETADOS EN ORINA DURANTE LARGO TIEMPO DESPUES DE LA ADMINISTRACION DEL AAS, LA CAPACIDAD DE DETECCION DEL ABUSO DE AAS SE VERIA NOTABLEMENTE MEJORADA.SE DESARROLLARA UNA METODOLOGIA QUE PERMITA EL ANALISIS DIRECTO DE LOS NUEVOS CONJUGADOS DE ESTEROIDES POR LC-MS/MS. ESTA METODOLOGIA SE APLICARA A MUESTRAS DE ORINA OBTENIDAS DESPUES DE LA ADMINISTRACION DE CADA AAS A VOLUNTARIOS SANOS PARA IDENTIFICAR NUEVOS METABOLITOS CONJUGADOS. LOS METABOLITOS DETECTADOS SERAN CARACTERIZADOS ESTRUCTURALMENTE Y SINTETIZADOS. SE ESTUDIARAN LOS PERFILES DE EXCRECION DE LOS NUEVOS METABOLITOS Y SE COMPARARAN CON LOS PERFILES DE EXCRECION DE LOS METABOLITOS CONVENCIONALES DETECTADOS EN LOS CONTROLES ANTIDOPAJE RUTINARIOS, PARA IDENTIFICAR LOS MEJORES MARCADORES PARA LA DETECCION DE LA ADMINISTRACION DE AAS.FINALMENTE, SE OPTIMIZARAN Y VALIDARAN METODOS DE CRIBADO Y DE CONFIRMACION PARA EL ANALISIS DE ESTOS NUEVOS METABOLITOS DE FASE II EN LOS CONTROLES ANTIDOPAJE RUTINARIOS.