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PDC2021-120967-I00

Financiado

MODIFICACION GENETICA DE CEPAS SILVESTRES RECALCITRANTES DE BACTERIAS ACIDO LACT...

MODIFICACION GENETICA DE CEPAS SILVESTRES RECALCITRANTES DE BACTERIAS ACIDO LACTICAS DE INTERES COMERCIAL Y BIOMEDICO MEDIANTE TRANSFERENCIA DE PROTEINAS CAS POR CONJUGACION NUESTRO OBJETIVO ES VALIDAR UNA HERRAMIENTA NOVEDOSA PARA LA MODIFICACION GENETICA DE CEPAS SILVESTRES DE BACTERIAS LACTICAS DE INTERES COMERCIAL, QUE SUELEN SER RESISTENTES A LA TRANSFORMACION, Y/O PARA LAS QUE NO SE DISPONE DE H... ver más

01/01/2021

UNICAN

138K€

Presupuesto del proyecto: 138K€

Líder del proyecto

UNIVERSIDAD DE CANTABRIA No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 469

Ver Participantes

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2021-01-01

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Participantes

UNICAN

Lider

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Líder del proyecto

UNIVERSIDAD DE CANTABRIA

Total investigadores 469

Presupuesto del proyecto 138K€

Descripción del proyecto NUESTRO OBJETIVO ES VALIDAR UNA HERRAMIENTA NOVEDOSA PARA LA MODIFICACION GENETICA DE CEPAS SILVESTRES DE BACTERIAS LACTICAS DE INTERES COMERCIAL, QUE SUELEN SER RESISTENTES A LA TRANSFORMACION, Y/O PARA LAS QUE NO SE DISPONE DE HERRAMIENTAS DE EXPRESION GENETICA. UTILIZAMOS LA CONJUGACION BACTERIANA COMO HERRAMIENTA DE ENTREGA IN VIVO DE UN KIT DE MODIFICACION GENETICA CRISPR-CAS, EVITANDO LA NECESIDAD DE EXPRESAR LA NUCLEASA EN LA CELULA DIANA. EL SISTEMA HA SIDO VALIDADO EN E.COLI Y SE HA PRESENTADO UNA PATENTE (PATENTE # P202030890).JUSTIFICACION DE LA PROPUESTA BASADA EN LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN BIO2017: HEMOS DEMOSTRADO QUE LAS PROTEINAS CAS FUSIONADAS A RELAXASAS CONJUGATIVAS (RELAXASA-CAS) PUEDEN SER TRANSFERIDAS MEDIANTE CONJUGACION A CELULAS RECEPTORAS, DONDE RECUPERAN SU ACTIVIDAD ENDONUCLEASA GUIADA POR ARNG, OBVIANDO LA EXPRESION DE CAS EN LA BACTERIA DIANA. HEMOS DEMOSTRADO EN E COLI QUE LA RELAXASA-CAS TRANSLOCADA GENERA EN EL RECEPTOR MUTACIONES INCORPORADAS A PARTIR DE UN ADN MOLDE TRANSFERIDO POR CONJUGACION (CONCASTOOL) HEMOS PRESENTADO UNA PATENTE PARA LA TRANSFERENCIA DE RELAXASA-CAS POR CONJUGACION, Y SU APLICACION EN LA MODIFICACION GENETICA DE CELULAS RECEPTORAS HEMOS DEMOSTRADO LA CONJUGACION DE E COLI A CEPAS DE TIPO SALVAJE DE LACTOBACILOS DE INTERES COMERCIAL NUESTRO PLAN ES TRANSFERIR CONCASTOOL POR CONJUGACION A BACTERIAS LACTICAS (LAB)SILVESTRES DE INTERES COMERCIAL (CONCASLAB) Y GENERAR MUTANTESOBJETIVO 1: PRUEBAS DE CONCEPTO PARA CONCASTOOL PARA COMPLETAR EL KIT DE HERRAMIENTAS CONCAS, PROBAREMOS EN E COLI QUE EL ARNG PUEDE SER INCLUIDO EN EL ADN TRANSFERIDO. DE ESTA MANERA, CONCASTOOL PODRA SER INTRODUCIDO EN CUALQUIER BACTERIA SILVESTRE SUSCEPTIBLE DE CONJUGACION. ADAPTAREMOS CONCAS A LACTOBACILOS PROBADOS COMO RECEPTORES CONJUGATIVOS. SE UTILIZARA UNA CEPA DE LABORATORIO DE LACTICASEIBACILLUS CASEI PARA OPTIMIZAR EL PROTOCOLO, SELECCIONANDO MUTANTES LACM COMO PRUEBA DE CONCEPTO, Y LUEGO USAREMOS LENTILACTOBACILLUS PARABUCHNERI, ESTIRPE NO TRANSFORMABLE Y RELEVANTE EN LAS PROPIEDADES ORGANOLEPTICAS DEL QUESO. LAS CEPAS OBTENIDAS SERAN CONSIDERADAS GRAS.OBJETIVO 2: APLICACIONES INDUSTRIALES DE CONCASLAB NOS CENTRAREMOS EN LA APLICACION DE CONCASLAB A LA MODIFICACION GENETICA DE LA CEPA PROBIOTICA PROPORCIONADA POR ADM-BIOPOLIS BIFIDOBACTERIUM ANIMALIS SUBSP LACTIS BPL1, QUE REDUCE LA GRASA CORPORAL Y TIENE EFECTO ANTIINFLAMATORIO. SU GENOMA ESTA BIEN CARACTERIZADO, PERO NO HAY HERRAMIENTAS DISPONIBLES PARA INTRODUCIR ADN, LO QUE FRENA LA INVESTIGACION Y MEJORA DE LA CEPA. OPTIMIZAREMOS UN PROTOCOLO DE CONJUGACION A BIFIDOBACTERIUM BASADO EN EL NUESTRO, UTILIZANDO PLASMIDOS LANZADERA CON MARCADOR DE RESISTENCIA A LOS ANTIBIOTICOS. LAS ESTRATEGIAS PARA OPTIMIZAR LA EFICIENCIA INCLUIRAN LA CLONACION DE METILASAS DE ADN BPL1 PARA SU EXPRESION EN LA E. COLI DONADORA. SE DISEÑARAN PLASMIDOS MOVILIZABLES ADAPTADOS QUE LLEVEN CONCASLAB PARA INTRODUCIR UNA MUTACION PUNTUAL EN EL GEN DE LA ALFA-GALACTOSIDASA DE BPL1. LAS MODIFICACIONES POSTERIORES SE DISEÑARAN CON ADM-BIOPOLIS.OBJETIVO 3: PLAN DE INNOVACION PARA LOS KITS DE HERRAMIENTAS CONCAS COMO CONTINUACION DEL ESTUDIO DE MERCADO Y FTO YA CONTRATADO PARA LAS APLICACIONES DE RELAXASA-CAS, SE SOLICITARA UN PLAN DE NEGOCIO PARA CREACION DE SPIN-OFF O SERVICIO DE MANIPULACION GENETICA DE BACTERIAS SILVESTRES. LA FORMACION EMPRESARIAL DEL EQUIPO DE INVESTIGACION FORMARA TAMBIEN PARTE DE NUESTROS OBJETIVOS ODIFICACION GENETICA\PROBIOTICO\GRAS\BIFIDOBACTERIUM\LENTILACTOBACILLUS PARABUCHNERI\ENDONUCLEASA CAS12A\RELAXASA TRWC\CRISPR-CAS\CONJUGACION BACTERIANA\MUTACIONES SIN HUELLA

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