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FIS2012-35248

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MICROSCOPIO DE FUERZAS ATOMICAS Y MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA DE REFLEXION TOTA...

MICROSCOPIO DE FUERZAS ATOMICAS Y MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA DE REFLEXION TOTAL INTERNA. ESTUDIO DE LA ENTRADA DE UN VIRUS (ADENOVIRUS) DENTRO DE UNA CELULA LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES EL ESTUDIO DE UN PROBLEMA BIOLOGICO, LA ENTRADA DE UN VIRUS, ADENOVIRUS, DENTRO DE UNA CELULA A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULAR. LAS PARTICULAS VIRALES SE ENLAZAN ESPECIFICAMENTE A LA MEMBRANA CELULA... ver más

01/01/2012

CSIC

25K€

Presupuesto del proyecto: 25K€

Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2012-01-01 No tenemos la información de la convocatoria

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CSIC

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Líder del proyecto

AGENCIA ESTATAL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGA... No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

TRL 2-3 | 552M€

Presupuesto del proyecto 25K€

Descripción del proyecto LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES EL ESTUDIO DE UN PROBLEMA BIOLOGICO, LA ENTRADA DE UN VIRUS, ADENOVIRUS, DENTRO DE UNA CELULA A TRAVES DE LA MEMBRANA CELULAR. LAS PARTICULAS VIRALES SE ENLAZAN ESPECIFICAMENTE A LA MEMBRANA CELULAR. EN EL CASO DEL ADENOVIRUS EL ANCLAJE A LA MEMBRANA IMPLICA LA PARTICIPACION DE DOS RECEPTORES QUE ACTUAN DE FORMA SECUENCIAL. PRIMERO LA FIBRA DEL ADENOVIRUS SE ENLAZA AL RECEPTOR CAR. UNA VEZ SE HA ENLAZADO A CAR, LA PARTICULA VIRAL SE DESLIZA SOBRE LA MEMBRANA HASTA QUE EL VIRUS SE ENLAZA CON LA INTEGRINA, INICIANDOSE LA ENDOCITOSIS DEL VIRUS EN LA CELULA. SOMOS CONSCIENTES DE QUE ESTE OBJETIVO CONSTIYUYE UN RETO DE GRAN DIFICULTAD. PLANTEAMOS ESTE PROYECTO COMO UNA SUCESION DE ETAPAS. INICIAMOS EL ESTUDIO CON LAS BICAPAS LIPIDICAS. LAS BICAPAS SON SISTEMAS FACILES DE PREPARAR Y SON MODELOS PARA ESTUDIAR LAS PROPIEDADES DE LAS MEMBRANAS BIOCELULARES Y LOS PROCESOS DE RECONOCIMIENTO MOLECULAR. OTRO PROCESO DE GRAN INTERES ES LA DETECCION DEL REMODELADO DE UNA BICAPA PRODUCIDO POR LA INTERACCION BICAPA-PROTEINA.PARA EL ESTUDIO DE ESTOS PROCESOS VAMOS A UTILIZAR TECNICAS MODERNAS DISTINTAS A LA MICROSCOPIA ELECTRONICA Y LA DIFRACCION DE RAYOS X. EN ESTE PROYECTO VAMOS A ESTUDIAR LA ENTRADA DE ADENOVIRUS MEDIANTE AFM COMBINADO CON UNA TECNICA DE FLUORESCENCIA, EL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA DE REFLEXION TOTAL INTERNA TIRFM. ESTE SISTEMA YA ESTA EN FUNCIONAMIENTO EN NUESTRO LABORATORIOEN SUS PARTES BASICAS QUE SON EL AFM Y EL TIRFM. NO OBSTANTE, REQUIERE MEJORAS IMPORTANTES: EN EL CASO DEL AFM, HAY QUE TRABAJAR EN EL SISTEMA DE PIEZOELECTRICOS DE 200 MICRAS DE ANCHURA QUE NO HEMOS UTILIZADO TODAVIA (HASTA AHORA HEMOS UTILIZADO EL DE 100 MICRAS). OTRO PROBLEMA QUE DEBEMOS RESOLVER ES EL PROBLEMA DE LA NO LINEARIZACION, SOBRE TODO EL PIEZO Z. EN CUANTO AL TIRFM, ESTA CONSTRUIDO, PERO DEBE SER ACOPLADO AL AFM.EL AFM ESTA BASADO EN UNA PUNTA QUE SIGUE EL CONTORNO DE LA TOPOGRAFIA DE UN OBJETO. ACTUALMENTE SE HA CONVERTIDO EN UN "LABORATORIO EN UNA PUNTA" PARA DETECTAR MULTITUD DE FENOMENOS BIOFISICOS DIFERENTES. AFM ES CAPAZ DE PROPORCIONAR IMAGENES DE VIRUS Y CELULAS EN MEDIO LIQUIDO, ES DECIR, EN CONDICIONES FISIOLOGICAS. LA FUNCIONALIZACION DE LA PUNTA PERMITE MEDIR INTERACCIONES A NIVEL DE MOLECULAS INDIVIDUALES, ESPECTROSCOPIA DE FUERZAS DE UNA SOLA MOLECULA (SMFS). ESTA TECNICA ES LA QUE VAMOS A USAR PARA LA MEDIDA DE LA INTERACCION DEL VIRUS CON LOS RECEPTORES CAR E INTEGRINA. UNA VERSION MAS MODERNA DE ESTA TECNICA CONSISTE EN FUNCIONALIZAR LA PUNTA CON UNA CELULA O CON UN VIRUS.EN LOS ULTIMOS AÑOS HA HABIDO UN RESURGIR DE LAS TECNICAS DE LA MICROSCOPIA OPTICA, ENTRE LAS QUE CABE DESTACAR EL MICROSCOPIO CONFOCAL. NOSOTROS NOS HEMOS CENTRADO EN EL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA DE REFLEXION TOTAL INTERNA, TIRFM. PUESTO QUE EL TIRF SOLO VE UNA ZONA DE 100 NM POR ENCIMA DE LA SUPERFICIE, ESTE MICROSCOPIO ESTA ESPECIALMENTE INDICADO PARA EL ESTUDIO DE BICAPAS LIPIDICAS Y MEMBRANAS CELULARES. UNA VENTAJA DEL TIRFM ES EL AUMENTO NOTABLE DE LA RESOLUCION TEMPORAL DE LA IMAGEN Y ESPECTROSCOPIA OPTICAS. LA RESOLUCION A NIVEL DE LA SUPERFICIE ES DEBIDA A QUE EN EL TIRF SE TRABAJA CON UNA ONDA EVANESCENTE POR LAS CONDICIONES DE REFLEXION TOTAL INTERNA, CUYA INTENSIDAD SE ANULA A UNOS 100 NM DE LA SUPERFICIE. ESTA TECNICA ES IDEAL PARA OBTENER IMAGENES DE PROTENAS INDIVIDUALES Y CONJUNTOS DE PROTEINAS EN LA MEMBRANA.

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