Descripción del proyecto
LA REGULACION GENICA POR RNAS NO CODIFICANTES (SRNAS) ES UBICUA EN BACTERIAS, OPERANDO EN TODA ADAPTACION FISIOLOGICA A LOS CAMBIOS EN EL MEDIO EXTERNO, EL MECANISMO CANONICO DE ACTIVIDAD DE LOS SRNAS IMPLICA EL APAREAMIENTO CON SECUENCIAS COMPLEMENTARIAS EN UNO O MULTIPLES MRNAS CODIFICADOS EN TRANS, LO QUE GENERALMENTE RESULTA EN UN BLOQUEO DE LA TRADUCCION Y LA DEGRADACION DE ESTOS, SIN EMBARGO, LA PARTICIPACION DE PROTEINAS DIVERSAS EN ESTE PROCESO AÑADE OTRAS POSIBILIDADES REGULATORIAS QUE SE ESTAN PONIENDO DE MANIFIESTO EN BACTERIAS DE BIOLOGIA COMPLEJA ALEJADAS DE LOS MODELOS CLASICOS,SINORHIZOBIUM MELILOTI ES UNA αPROTEOBACTERIA DEL GRUPO DE LOS RIZOBIOS, CONOCIDOS POR SU CAPACIDAD PARA FIJAR NITROGENO EN SIMBIOSIS CON LEGUMINOSAS, S, MELILOTI CODIFICA UN NUMERO EXCEPCIONALMENTE ALTO DE TRANSPORTADORES ABC, QUE LE DOTAN DE LA VERSATILIDAD METABOLICA NECESARIA PARA ADAPTARSE A LA OLIGOTROFIA DEL SUELO Y AL AMBIENTE INTRACELULAR EN LA PLANTA, LOS RESULTADOS DEL PROYECTO ACTUAL (BFU2013-48282-C2-2-P) INDICAN QUE UNA GRAN PARTE DE LOS MRNAS QUE CODIFICAN TRANSPORTADORES ABC PARA LA ADQUISICION DE COMPUESTOS NITROGENADOS INTEGRAN UN REGULON DEL TIPO DENSE OVERLAPPING REGULON GOBERNADO POR AL MENOS TRES SRNAS, ABCR1, ABCR2 Y NFER1, MEDIANTE UN MECANISMO CANONICO DE SILENCIAMIENTO POST-TRANSCRIPCIONAL, LA ENDORIBONUCLEASA SMYBEY Y LA S-ADENOSIL METIONINA SINTETASA (METK) SON DOS PROTEINAS FUNCIONALMENTE RELACIONADAS CON ESTOS SRNAS, SMYBEY ES UNICA POR SU CAPACIDAD PARA DEGRADAR RNA DE CADENA SIMPLE Y DOBLE, SIENDO MRNAS DIANA DE ABCR1/2 Y ALGUN TRANSCRITO RELACIONADO CON LA FIJACION DE NITROGENO, PROBABLEMENTE REGULADO POR RNAS ANTISENTIDO (ASRNAS), ALGUNO DE SUS SUSTRATOS, POR INTERACCION DIRECTA CON METK, ABCR2 Y NFER1 ANTAGONIZAN LA ACTIVIDAD DE ESTE ENZIMA, LO QUE PROVOCA UNA DISMINUCION DE LOS NIVELES ENDOGENOS DEL PRINCIPAL DONADOR DE GRUPOS METILO, LA S-ADENOSIL METIONINA (SAM), CUYAS CONSECUENCIAS FISIOLOGICAS DESCONOCEMOS,EL OBJETIVO GENERAL DE ESTA PROPUESTA ES PROFUNDIZAR EN LOS MECANISMOS QUE OPERAN EN LA REGULACION DEL METABOLISMO Y LA FIJACION SIMBIOTICA DE NITROGENO POR TRANS-SRNAS, I,E, ABCR1/2 Y NFER1, Y ASRNAS EN S, MELILOTI, SON OBJETIVOS ESPECIFICOS:1,- DISECCION DEL REGULON GOBERNADO POR LOS SRNAS ABCR Y NFER1 Y DE LOS MECANISMOS REGULATORIOS DERIVADOS DE ESTE, SE ESTUDIARA LA REGULACION DE ESTOS SRNAS EN RESPUESTA A LA DISPONIBILIDAD DE FUENTES COMBINADAS DE NITROGENO Y SE IDENTIFICARAN MEDIANTE RNASEQ SUS DIANAS PRIMARIAS (TARGETOME), POR LA IMPORTANCIA DE NFER1 EN SIMBIOSIS, SE INVESTIGARA SU CONTRIBUCION A LA FIJACION DE NITROGENO Y SE IDENTIFICARA EL FACTOR DE TRANSCRIPCION QUE ESPECIFICA SU EXPRESION DIFERENCIAL,2, DETERMINACION DE LAS BASES MOLECULARES DE LA VERSATILIDAD CATALITICA DE SMYBEY Y DE SU CONTRIBUCION AL SILENCIAMIENTO POST-TRANSCRIPCIONAL MEDIADO POR SRNAS, SE PROPONE RESOLVER LA ESTRUCTURA DE SMYBEY, IDENTIFICAR SUS SUSTRATOS IN VIVO Y ANALIZAR SU PARTICIPACION EN LA DEGRADACION DE MRNAS INDUCIDA POR ABCR1/2 Y ASRNAS,3, AVANZAR EN EL ESTUDIO DE LA RIBOREGULACION DE LA HOMEOSTASIS DE SAM Y SUS CONSECUENCIAS FISIOLOGICAS, SE IDENTIFICARAN A NIVEL GENOMICO LOS TRANSCRITOS QUE INTERACCIONAN CON METK Y SE ESTUDIARAN PROCESOS SENSIBLES A LOS NIVELES ENDOGENOS DE SAM, E,G, METILACION DE RNA/DNA, EXPRESION DE GENES REGULADOS POR RIBOSWITCHES SAM II O MOTILIDAD, Y LA CONTRIBUCION ESPECIFICA DE LOS SRNAS ABCR Y NFER1 A LA REGULACION DE ESTOS, SINORHIZOBIUM MELILOTI\RNA REGULADOR\RNA NO CODIFICANTE\SRNA\RNA ANTISENTIDO\ENDORIBONUCLEASA\S-ADENOSIL METIONINA