Descripción del proyecto
EN EL PRESENTE PROYECTO, SE PLANTEA LA IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE MECANISMOS POST-TRANSDUCCIONALES QUE CONTRIBUYEN A LA PROGRESION CIRCADIANA, SE PROPONE CARACTERIZAR LAS IMPLICACIONES FUNCIONALES DE LA FOSFORILACION, ACETILACION Y SUMOILACION DE PROTEINAS ESENCIALES DEL RELOJ CIRCADIANO DE ARABIDOPSIS THALIANA, PARA ALCANZAR ESTE OBJETIVO GENERAL, SE PLANTEAN LOS SIGUIENTES OBJETIVOS ESPECIFICOS: 1, EL PRIMER OBJETIVO SE CENTRA EN ANALIZAR LOS EFECTOS DE LA FOSFORILACION POR CK2 DE COMPONENTES DEL RELOJ SOBRE UNA PROPIEDAD CARACTERISTICA DE LA FUNCION CIRCADIANA CONOCIDA COMO COMPENSACION DE TEMPERATURA, REALIZAREMOS UN ANALISIS EXHAUSTIVO DEL PERIODO CIRCADIANO BAJO DIFERENTES TEMPERATURAS DESPUES DEL ALTERAR LA ACTIVIDAD CK2 (MEDIANTE SOBRE-EXPRESION, MUTACION INDUCIBLE O TRATAMIENTOS FARMACOLOGICOS), DE ACUERDO CON NUESTROS RESULTADOS PREVIOS, EXAMINAREMOS SI LA FUNCION ANTAGONISTA DE CK2 SOBRE LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DE CCA1 ES TAMBIEN OBSERVABLE EN DIVERSAS TEMPERATURAS, LOS EXPERIMENTOS DE DOBLE-CHIP-SEQ PERMITIRAN LA IDENTIFICACION IN VIVO DE LAS DIANAS CO-REGULADAS POR CKB4 Y CCA1, EN ESTOS ESTUDIOS SE UTILIZARAN TAMBIEN PLANTAS CON UNA MUTACION DOMINANTE INDUCIBLE DE CK2 O PLANTAS TRATADAS CON INHIBIDORES DE CK2, LA CONSECUCION DE ESTE OBJETIVO PROPORCIONARA EVIDENCIAS PIONERAS SOBRE LOS MECANISMOS RESPONSABLES DE LA COMPENSACION DE TEMPERATURA DEL RELOJ CIRCADIANO EN PLANTAS,2, UN SEGUNDO OBJETIVO DE NUESTRO TRABAJO CONSISTIRA EN EL ANALISIS DE LA ACETILACION POST-TRANSDUCCIONAL DE PROTEINAS DEL RELOJ Y SU IMPORTANCIA BIOLOGICA PARA LA FUNCION CIRCADIANA, DE ACUERDO CON NUESTROS RESULTADOS PRELIMINARES, LOS ESTUDIOS SERAN INICIADOS CON LA PROTEINA MYB, LCL5 (SANT-1), PARA SER CONTINUADOS CON OTRAS PROTEINAS DEL RELOJ, REALIZAREMOS EXPERIMENTOS DE CO-INMUNOPRECIPITACION (CO-IP) EN PLANTAS QUE EXPRESAN UNA VERSION MINIGEN DE CADA COMPONENTE PARA VERIFICAR SI ESTAS PROTEINAS ESTAN ACETILADAS, LA IDENTIFICACION DE RESIDUOS ACETILADOS Y SU MUTACION SUBSIGUIENTE PROPORCIONARAN UNA HERRAMIENTA UTIL PARA EXAMINAR EL PAPEL DE LA ACETILACION COMO REGULADOR DE LA ESTABILIDAD DE LA PROTEINA, O DEL REMODELADO DE LA CROMATINA, ENTRE OTROS, LOS RESULTADOS DE ESTOS ESTUDIOS REVELARAN, POR VEZ PRIMERA EN PLANTAS, LA IMPLICACION BIOLOGICA DE LA ACETILACION DE PROTEINAS NO-HISTONAS EN LA PROGRESION CIRCADIANA DEL RELOJ,3, EL TERCER OBJETIVO CONSISTIRA EN LA CARACTERIZACION DE LA SUMOILACION DE PROTEINAS DEL RELOJ COMO MECANISMO REGULADOR DE LA FUNCION DEL RELOJ, EL ANALISIS ¿IN SILICO" HA REVELADO QUE UN NUMERO DE PROTEINAS DEL RELOJ, INCLUYENDO COMPONENTES DE LA ENTRADA DE LUZ AL RELOJ, CONTIENEN MOTIVOS CONSENSO DE SUMOILACION, ASI, REALIZAREMOS EXPERIMENTOS DE CO-IP EN PLANTAS QUE EXPRESEN UNA VERSION MINIGEN DE CADA UNO DE ESTOS COMPONENTES PARA VERIFICAR SI LAS PROTEINAS SON SUSCEPTIBLES DE SUMOILACION, LOS RESIDUOS SUMOILADOS SERAN MUTADOS Y SE EXAMINARA SI LA SUMOILACION TIENE UN PAPEL IMPORTANTE EN LA REGULACION DE LA ESTABILIDAD PROTEICA O DE LA LOCALIZACION SUBCELULAR DE ESTAS PROTEINAS, LA IMPORTANCIA BIOLOGICA DE LA SUMOILACION TAMBIEN SERA EXAMINADA ANALIZANDO LOS EFECTOS DE ESTAS MUTACIONES SOBRE LA INDUCCION POR LUZ REGULADA POR EL RELOJ O LA REGULACION FOTOPERIODICA DEL TIEMPO DE FLORACION, LOS RESULTADOS DE ESTOS ESTUDIOS REVELARAN EL PAPEL DE LA SUMOILACION EN LA RUTA DE ENTRADA DE LUZ AL RELOJ,