MECANISMO MOLECULAR DE FIXK2: UN REGULADOR TRANSCRIPCIONAL CLAVE EN LA INTERACCI...
MECANISMO MOLECULAR DE FIXK2: UN REGULADOR TRANSCRIPCIONAL CLAVE EN LA INTERACCION SIMBIOTICA RHIZOBIUM-LEGUMINOSA
ESTE PROYECTO PRETENDE DESCUBRIR NUEVOS ASPECTOS DE LA COMPLEJA RED DE REGULACION DE BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM, UNAS DE LAS BACTERIAS MAS BENEFICIOSAS E IMPORTANTES QUE SE USAN EN LA AGRICULTURA. ESTA BACTERIA ES CAPAZ DE ESTABLECE...
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Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO PRETENDE DESCUBRIR NUEVOS ASPECTOS DE LA COMPLEJA RED DE REGULACION DE BRADYRHIZOBIUM JAPONICUM, UNAS DE LAS BACTERIAS MAS BENEFICIOSAS E IMPORTANTES QUE SE USAN EN LA AGRICULTURA. ESTA BACTERIA ES CAPAZ DE ESTABLECER INTERACCIONES SIMBIOTICAS CON PLANTAS DE SOJA, DANDO LUGAR A ESTRUCTURAS ESPECIALIZADAS, LOS NODULOS, EN EL INTERIOR DE LOS CUALES SE LLEVA A CABO EL PROCESO DE FIJACION DE NITROGENO. DURANTE EL ESTABLECIMIENTO DE LA SIMBIOSIS ASI COMO EN EL NODULO, LOS RIZOBIOS TIENEN QUE ADOPTAR ESTRATEGIAS QUE LE PERMITAN ADAPTAR SU FISIOLOGIA A CAMBIOS EN SU HABITAT. POR EJEMPLO, TIENEN QUE DESARROLLAR SISTEMAS DE PROTECCION CONTRA LAS ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO PRODUCIDAS NO SOLO POR LOS SISTEMAS DE DEFENSA DE LA PLANTA DURANTE EL PROCESO DE INFECCION, SINO COMO PRODUCTO DE LA RESPIRACION BACTERIANA O EN EL PERIODO DE SENESCENCIA. LOS RIZOBIOS POSEEN ADEMAS LA OXIDASA TERMINAL CBB3 DE ALTA AFINIDAD POR OXIGENO QUE LES PERMITE RESPIRAR EN EL AMBIENTE MICROAEROBICO DEL NODULO. POR LO TANTO, LOS RIZOBIOS TIENEN QUE CAPACES DE INDUCIR LA EXPRESION DE PROTEINAS REGULADORAS IMPLICADAS EN EL CONTROL LA EXPRESION DE GENES EN FUNCION DE CAMBIOS MEDIOAMBIENTALES O ESTRESES. EN B. JAPONICUM, LA PROTEINA FIXK2 JUEGA UN PAPEL CLAVE EN LA REGULACION DE GENES ESENCIALES TANTO EN VIDA LIBRE COMO EN SIMBIOSIS. MIENTRAS QUE LA EXPRESION DE FIXK2 SE INDUCE POR EL SISTEMA DE DOS COMPONENTES FIXLJ EN RESPUESTA A BAJA TENSION DE OXIGENO, LA PROTEINA FIXK2 CONTROLA POSITIVAMENTE LA EXPRESION DE MAS DE 200 GENES. ADEMAS, FIXK2 AUTO-REGULA NEGATIVAMENTE (DIRECTA O INDIRECTAMENTE) SU PROPIA EXPRESION. FIXK2 CONSTITUYE UN EJEMPLO EXCEPCIONAL EN LA FAMILIA DE REGULADORES TRANSCRIPCIONALES DE TIPO FNR/CRP, PROTEINAS QUE RESPONDEN A UN AMPLIO RANGO DE SEÑALES INTRA O EXTRACELULARES. POR UN LADO, NO NECESITA NINGUN COFACTOR (CONOCIDO) PARA ACTIVAR LA TRANSCRIPCION EN COLABORACION CON LA ARN POLIMERASA DE B. JAPONICUM IN VITRO. POR OTRO, PUEDE RESPONDER DIRECTAMENTE A ESTRES OXIDATIVO, MEDIANTE LA OXIDACION DE UN RESIDUO DE CISTEINA (C183). RECIENTEMENTE HEMOS OBSERVADO QUE FIXK2 PODRIA ESTAR CONTROLADO POR DOS CLASES DE PROTEOLISIS: ESPECIFICA EN EL RESIDUO DE LEUCINA 221 Y GENERAL POR LOS SISTEMAS PROTEOLITICOS DE TIPO CLP. CABE DESTACAR QUE, LA FORMA INACTIVA DE FNR, UN HOMOLOGO DE FIXK2 EN ESCHERICHIA COLI ES SUBSTRATO DEL SISTEMA CLPXP.EN ESTA PROPUESTA SE PLANTEAN DOS OBJETIVOS PRINCIPALES. EN EL PRIMER OBJETIVO SE PRETENDE PROFUNDIZAR EN EL MECANISMO MOLECULAR DE FIXK2, A NIVEL TRANSCRIPCIONAL Y POST-TRADUCCIONAL. POR ELLO, SE TRATARA DE IDENTIFICAR Y CARACTERIZAR EL REGULADOR QUE CONTROLA NEGATIVAMENTE LA EXPRESION DE FIXK2. ADEMAS SE ESTUDIARA EL PAPEL DEL CONTROL REDOX DE FIXK2 EN LA SIMBIOSIS CON PLANTAS DE SOJA. ASIMISMO SE INVESTIGARA EL CONTROL PROTEOLITICO DE FIXK2, PARA CONOCER EL PAPEL DEL RESIDUO DE LEUCINA 221 Y EL MECANISMO DE DEGRADACION POR PROTEASAS DE TIPO CLP.EL SEGUNDO OBJETIVO ES LA CARACTERIZACION DE LAS PROTEASAS DE TIPO CLP DE B. JAPONICUM, TANTO IN VITRO COMO IN VIVO. RECIENTEMENTE SE HA DESCRITO QUE ESTE TIPO DE PROTEINAS ESTAN IMPLICADAS EN LA INTERACCION BACTERIA-HOSPEDADOR. SIN EMBARGO, NO SE HA ESTUDIADO SU PAPEL EN NINGUNA ESPECIE DE RHIZOBIUM, POR LO QUE RESULTA INTERESANTE EL ESTUDIAR EL FENOTIPO DE CEPAS MUTANTES EN LOS GENES CLP EN VIDA LIBRE Y EN SIMBIOSIS. POR ULTIMO, SE APLICARAN TECNICAS DE PROTEOMICA PARA LA IDENTIFICACION DE SUSTRATOS DE LOS SISTEMAS PROTEOLITICOS CLPAP Y CLPXP DE B. JAPONICUM. RADYRHIZOBIUM JAPONICUM\TRANSCRIPTOMICA\SIMBIOSIS\REGULACION\PROTEOMICA\PROTEINA CRP/FNR\PROTEASAS TIPO CLP\ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO
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