Descripción del proyecto
EN ESTE PROYECTO SE ABORDARA COMO LOS PROCESOS DE ASIMILACION DEL NITROGENO, CARBONO O DE METALES COMO EL COBRE ESTAN CONDICIONADOS POR LA INTERFERENCIA QUE EN ELLOS PRODUCE EL ESTADO REDOX CELULAR, A TRAVES DE COMPUESTOS METABOLICOS ESPECIFICOS, COMO ES EL CASO DE LOS OXIACIDOS 2-OXOGLUTARATO O PIRUVATO O BIEN A TRAVES DE LA OXIDACION/REDUCCION DE ALGUNAS PROTEINAS QUE MEDIAN DICHO PROCESO DE REGULACION, PARA ESTUDIAR ESTOS PROCESOS UTILIZAMOS COMO ORGANISMO MODELO LA CIANOBACTERIA UNICELULAR SYNECHOCYSTIS SP, PCC 6803, EN RELACION CON EL PROYECTO ANTERIOR (BFU2010-15708) ESTA PROPUESTA TIENE ASPECTOS DE CONTINUIDAD Y OTROS QUE SON NOVEDOSOS, PARA LLEVAR A CABO ESTE PLAN DE TRABAJO SE CONSTRUYERON EN EL PROYECTO ANTERIOR TODA UNA BATERIA DE ESTIRPES MUTANTES DE DICHA CIANOBACTERIA, EN ESTAS SE PUEDE ALTERAR DICHO ESTADO REDOX CELULAR, BIEN POR UNA MENOR DEFENSA FRENTE A COMPUESTOS QUE PROVOCAN ESTRES OXIDATIVO EN LA CELULA, POR ALTERACIONES EN LOS PROCESOS DE ASIMILACION DE NITROGENO O CARBONO, O EN OTROS CASOS POR PRESENTAR UNA MAYOR SENSIBILIDAD A LA PRESENCIA DE METALES, LOS OBJETIVOS CONCRETOS DEL PROYECTO SERAN LOS SIGUIENTES:1, INTERFERENCIA EN LOS NIVELES DE 2-OXOGLUTARATO, EL SENSOR DEL ESTADO C/N, SE DETERMINARA COMO SE AFECTAN LOS GENES IMPLICADOS EN LA ASIMILACION DEL NITROGENO EN SYNECHOCYSTIS POR LA ACCION DE DISTINTAS ESPECIES REACTIVAS DE OXIGENO, EN ESPECIAL EL PEROXIDO DE HIDROGENO, LOS RESULTADOS PREVIOS SUGIEREN QUE ESTE COMPUESTO ALTERA LOS NIVELES DE 2-OXOGLUTARATO Y POR TANTO INTERFIERE EN LA EXPRESION GENICA A TRAVES DE LA SEÑALIZACION MEDIADA POR EL FACTOR TRANSCRIPCIONAL NTCA, LOS NIVELES DE DISTINTOS METABOLITOS Y LOS NIVELES DE ENZIMAS COMO LA GLUTAMINA SINTETASA SERVIRAN COMO REFERENCIA DE LA INTERFERENCIA REALIZADA, IGUALMENTE SE ANALIZARA EL EFECTO QUE TIENE EL ESTADO REDOX CELULAR EN LOS PROCESOS DERIVADOS DE LA CARENCIA DE FUENTE NITROGENADA, EN ESPECIAL EL RECICLAJE DEL NITROGENO CONTENIDO EN LAS FICOBILIPROTEINAS, PROCESO CONOCIDO COMO BLEACHING, 2, ALTERACION DE LA ACUMULACION DE CARBONO, UTILIZANDO LOS DISTINTOS MUTANTES CONSTRUIDOS QUE CARECEN DE GLUCOGENO EN SYNECHOCYSTIS SE ANALIZARA QUE OCURRE CON EL CARBONO FIJADO EN DICHOS MUTANTES, EN CONDICIONES NORMALES DE CULTIVO VERSUS CONDICIONES DE DEFICIENCIA DE NITROGENO, ANALIZAREMOS COMO INTERFIERE EL ESTADO REDOX EN LA ACUMULACION DE CARBONO FIJADO, UTILIZANDO MUTANTES INCAPACES DE SINTETIZAR GLUCOGENO, SE ANALIZARA PORQUE DICHOS MUTANTES SON INCAPACES DE REALIZAR EL PROCESO DE BLEACHING EN AUSENCIA DE FUENTE DE NITROGENO EN COMPARACION CON LA ESTIRPE SILVESTRE, SE DETERMINARA IGUALMENTE PORQUE MUTANTES CARENTES DE GLUCOGENO SINTASA, PERO CONTENIENDO LA ENZIMA ADP-GLUCOSA PIROFOSFORILASA, NO SON VIABLES, 3, PERCEPCION DE METALES Y ESTADO REDOX, SE DESCIFRARA EL SISTEMA DE INTERCAMBIO DE EXPRESION MEDIADO POR COBRE DE LOS GENES DE LA PLASTOCIANINA (PETE) Y EL CITOCROMO C6 (PETJ), UTILIZANDO MUTANTES QUE PRESENTAN UNA ALTERACION EN EL SISTEMA DE PERCEPCION DEL COBRE, ACTUALMENTE NO HAY DATOS QUE PERMITAN INFERIR LOS FACTORES TRANSCRIPCIONALES IMPLICADOS, NI SU NATURALEZA DE ACTIVADORES/REPRESORES, ADEMAS, SE ANALIZARA LA ESPECIFICIDAD DE ESTE SISTEMA RESPECTO A LA PRESENCIA DE OTROS METALES QUE ALTERAN LA EXPRESION DE DICHOS GENES, FINALMENTE DETERMINAREMOS COMO EL SISTEMA RESPONDE EN CONDICIONES DE ESTRES OXIDATIVO MEDIADO POR PEROXIDO DE HIDROGENO, BLEACHING\ CIANOBACTERIA\ COBRE\ GLUCÓGENO\ METABOLISMO DEL NITRÓGENO\ 2-OXOGLUTARATO\ PLASTOCIANINA\ REGULACIÓN REDOX\ SYNECHOCYSTIS\