EVOLUCION IN VITRO Y SELECCION DE TOXINAS CRY ACTIVAS FRENTE INSECTOS NO DIANA
LAS PROTEINAS CON ACTIVIDAD INSECTICIDA (TOXINAS CRY) PRODUCIDAS POR BACILLUS THURINGIENSIS SON UNA ALTERNATIVA MUY UTILIZADA EN CONTROL BIOLOGICO DE INSECTOS TANTO EN LA LUCHA DE PLAGAS VEGETALES COMO DE INSECTOS VECTORES DE ENFE...
LAS PROTEINAS CON ACTIVIDAD INSECTICIDA (TOXINAS CRY) PRODUCIDAS POR BACILLUS THURINGIENSIS SON UNA ALTERNATIVA MUY UTILIZADA EN CONTROL BIOLOGICO DE INSECTOS TANTO EN LA LUCHA DE PLAGAS VEGETALES COMO DE INSECTOS VECTORES DE ENFERMEDADES, LAS TOXINAS CRY SON UNA ALTERNATIVA MAS RESPETUOSA CON EL MEDIO AMBIENTE QUE LOS INSECTICIDAS QUIMICOS, YA QUE ACTUAN ESPECIFICAMENTE SOBRE UNA O POCAS ESPECIES DE INSECTOS SIN PERJUICIO PARA EL RESTO DE ESPECIES DE INTERES ECOLOGICO O ECONOMICO (POLINIZADORES, FAUNA AUXILIAR, ETC), ADEMAS, LAS TOXINAS CRY SON INOCUAS PARA ORGANISMOS SUPERIORES TALES COMO ANFIBIOS, REPTILES, AVES, PECES O MAMIFEROS, EL TRATAMIENTO CON TOXINAS CRY NO DEJA RESIDUOS EN LAS ZONAS APLICADAS, YA QUE SON DEGRADADAS POR LA RADIACION SOLAR Y OTROS AGENTES DEL MEDIO AMBIENTE, DADA LA ALTA ESPECIFICIDAD DE LAS TOXINAS CRY, NO EXISTE UNA TOXINA CRY ACTIVA PARA CADA UNO DE LOS INSECTOS QUE SE DESEA CONTROLAR POR INCIDIR NEGATIVAMENTE BIEN EN UN PLANO ECONOMICO O SANITARIO, GRACIAS AL DESARROLLO DE TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR, SE DISPONE DE HERRAMIENTAS PARA MODIFICAR Y SELECCIONAR PROTEINAS CON PROPIEDADES DIFERENTES A LAS PROTEINAS DE PARTIDA, UNA DE ELLAS ES LA QUE SE CONOCE CON EL NOMBRE DE ¿EVOLUCION IN VITRO DE PROTEINAS¿, CON DICHAS HERRAMIENTAS TENEMOS LA OPORTUNIDAD DE AUMENTAR LA DIVERSIDAD DE LAS PROTEINAS CRY DE FORMA QUE SE PUEDAN OBTENER VARIANTES ACTIVOS FRENTE A INSECTOS ORIGINALMENTE NO DIANA, PROPONEMOS LA MODIFICACION DE UNA PROTEINA CRY Y LA SELECCION IN VITRO DE AQUELLOS VARIANTES QUE PRESENTEN UNION ESPECIFICA A PROTEINAS DEL EPITELIO INTESTINAL DE INSECTOS NO DIANA, PARA ELLO SE PROCEDERA A LA SUSTITUCION DEL LOOP 2 DEL DOMINIO II DE UNA TOXINA CRY (REGION RESPONSABLE DEL RECONOCIMIENTO Y UNION AL RECEPTOR) POR LAS REGIONES CDR (REGIONES HIPERVARIABLES) DE UNA LIBRERIA DE ANTICUERPOS HUMANOS, CON ELLO SE DISPONDRA DE UNA LIBRERIA DE TOXINAS CRY CON CIEN MIL MILLONES DE VARIANTES DISTINTOS EN SU DOMINIO II, LO QUE IMPLICARA LA OBTENCION DE TOXINAS CRY CON PERFILES DE UNION TOTALMENTE NUEVOS, TRAS LA MODIFICACION DE LA TOXINA SE UTILIZARA UNA DE LAS HERRAMIENTA DE SELECCION MAS POTENTES QUE SE CONOCEN: LA EXPRESION DE LIBRERIAS SOBRE BACTERIOFAGOS, DICHA HERRAMIENTA CONSISTE EN LA EXPRESION DE UNA PROTEINA (EN NUESTRO CASO LA TOXINA CRY) EN LA CAPSIDE DE UN FAGO, CON LO QUE LA TOXINA ES ACCESIBLE PARA INTERACCIONAR CON OTRAS PROTEINAS QUE ACTUARIAN DE RECEPTORES (EN NUESTRO CASO LOS POTENCIALES RECEPTORES DEL INTESTINO DEL INSECTO NO DIANA), DICHO SISTEMA DE EXPRESION HA SIDO DESARROLLADO POR NOSOTROS EN EL DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA DE LA UNIVERSIDAD DE CAMBRIDGE Y SE ENCUENTRA PATENTADO,PROPONEMOS QUE MEDIANTE LA EVOLUCION IN VITRO DE PROTEINAS PODEMOS MODIFICAR LA ACTIVIDAD DE UNA TOXINA CRY ACTIVA FRENTE A LEPIDOPTEROS Y REDIRIGIRLA HACIA INSECTOS QUE NO SON SUSCEPTIBLES A LA ACCION DE DICHA TOXINA, PARA PROBAR NUESTRA HIPOTESIS USAREMOS TRES INSECTOS MODELO: CERATITIS CAPITATA, INSECTO QUE REPRESENTA UNA IMPORTANTE PLAGA AGRICOLA A NIVEL MUNDIAL Y DE FACIL MANTENIMIENTO EN EL LABORATORIO, RHODNIUS PALLESCENS, INSECTO TRANSMISOR DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS Y ANOPHELES GAMBIAE, INSECTO VECTOR DE LA MALARIA Y DEL QUE EXISTEN EJEMPLOS NATURALES DE TOXINAS CRY ACTIVAS, LOS RESULTADOS POSITIVOS DEL PROYECTO REPRESENTARAN UN GRAN AVANCE EN EL CONTROL BIOLOGICO DE INSECTOS YA QUE SE ABRE LA POSIBILIDAD DE SELECCION DE TOXINAS POTENCIALMENTE ACTIVAS FRENTE A UNA AMPLIA VARIEDAD DE INSECTOS, Toxinas CryBacillus thuringiensisevolución in vitro de proteínasexposición de proteínas sobre fagosCeratitis capitataCulex quinquefasciatusRhodnius pallescens8ver más
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