Descripción del proyecto
LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES DESARROLLAR METODOS PARA LLEVAR A CABO DOS ETAPAS CLAVES, LA PREPARACION DE LA MUESTRA Y LA DETECCION FLUORESCENTE, PARA EL ANALISIS POR ELECTROFORESIS EN CAPILARES Y EN MICROCHIPS DE ISOFORMAS DE GLICOPROTEINAS MARCADORAS DE ENFERMEDADES,LOS CAMBIOS EN LA GLICOSILACION DE LAS PROTEINAS ESTAN ASOCIADOS CON LA SITUACION FISIOPATOLOGICA DE LOS ORGANISMOS, LAS VARIACIONES DE LAS PROPORCIONES DE LAS DISTINTAS ISOFORMAS DE UNA GLICOPROTEINA PUEDEN APORTAR MAYOR INFORMACION SOBRE LOS POSIBLES ESTADOS PATOLOGICOS DEL INDIVIDUO QUE LA CONCENTRACION TOTAL DE LA GLICOPROTEINA, SE HA DEMOSTRADO LA UTILIDAD DE LA ELECTROFORESIS CAPILAR PARA SEPARAR ISOFORMAS DE DIFERENTES GLICOPROTEINAS, SIN EMBARGO, EN LA BIBLIOGRAFIA SE ENCUENTRAN MUY POCAS APLICACIONES A MUESTRAS NATURALES DE INTERES CLINICO,LAS DOS PRINCIPALES RAZONES DE ESTA BAJA APLICACION A MUESTRAS NATURALES SON LAS DIFICULTADES PLANTEADAS POR LAS ETAPAS DE PREPARACION DE LA MUESTRA Y DE DETECCION CON ELEVADA SENSIBILIDAD QUE SON IMPRESCINDIBLES, YA QUE UNA DETERMINADA GLICOPROTEINA EN UN FLUIDO O TEJIDO BIOLOGICO SE ENCUENTRA EN PRESENCIA DE UNA MATRIZ MUY COMPLEJA Y, GENERALMENTE, EN MUY BAJA CONCENTRACION,COMO SISTEMAS REPRESENTATIVOS DE GLICOPROTEINAS CON DIFERENTES CARACTERISTICAS, EN ESTE PROYECTO SE ABORDA LA RESOLUCION DE ESTOS PROBLEMAS PARA DOS GLICOPROTEINAS POTENCIALES BIOMARCADORES DE PATOLOGIAS CARDIOVASCULARES Y PROSTATICAS: LA ALFA 1-GLICOPROTEINA ACIDA (AGP) Y EL ANTIGENO ESPECIFICO PROSTATICO (PSA),PARA LA PURIFICACION Y CONCENTRACION DE LAS GLICOPROTEINAS A PARTIR DE FLUIDOS BIOLOGICOS, DE MODO QUE NO SE PRODUZCA DISCRIMINACION DE LAS ISOFORMAS, SE PLANTEAN DIFERENTES METODOS INMUNOCROMATOGRAFICOS COMBINADOS CON OTROS SISTEMAS DE SEPARACION BASADOS EN AFINIDAD,PARA LA DETECCION DE LAS GLICOPROTEINAS AISLADAS, DE MODO QUE SE OBTENGA ELEVADA SENSIBILIDAD Y NO SE PIERDA LA RESOLUCION DE LAS ISOFORMAS, SE PROPONEN DIFERENTES METODOS DE DERIVATIZACION COVALENTE Y DETECCION POR FLUORESCENCIA INDUCIDA POR LASER, LAS ETAPAS DE INYECCION, SEPARACION ELECTROFORETICA Y DETECCION SE INTEGRARAN FINALMENTE EN FORMATOS DE MICROCHIP, LOS PROCEDIMIENTOS DESARROLLADOS SE APLICARAN AL ANALISIS DE UN NUMERO REDUCIDO DE MUESTRAS DE INDIVIDUOS SANOS Y DE PACIENTES CON PATOLOGIAS CARDIOVASCULARES Y PROSTATICAS, LA HISTORIA CLINICA DE LOS INDIVIDUOS SERA PERFECTAMENTE CONOCIDA POR LOS EQUIPOS MEDICOS, SE ESTUDIARA COMO ETAPA FINAL DEL PROYECTO SI PUEDE ESTABLECERSE UNA CORRELACION ENTRE LAS PROPORCIONES RELATIVAS DE LAS DIVERSAS GLICOFORMAS DE CADA PROTEINA Y LA SITUACION FISIOPATOLOGICA DE LOS CORRESPONDIENTES INDIVIDUOS, GLICOPROTEINAS\ALFA-1-GLICOPROTEINA ACIDA\ANTIGENO ESPECIFICO PROSTATICO\ELECTROFORESIS CAPILAR\MINIATURIZACION