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BFU2016-79927-P

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ESTUDIOS BIOQUIMICOS DE LA FINALIZACION DE LA REPLICACION CROMOSOMICA. DISECCION...

ESTUDIOS BIOQUIMICOS DE LA FINALIZACION DE LA REPLICACION CROMOSOMICA. DISECCION MOLECULAR DEL DESENSAMBLAJE DEL REPLISOMA EN CONDICIONES NORMALES Y DE ESTRES REPLICATIVO. LA REPLICACION DEL ADN ES UN PROCESO ESENCIAL EN CUALQUIER ORGANISMO VIVO. LAS CELULAS EUCARIOTAS UTILIZAN MULTIPLES ORIGENES DE REPLICACION PARA REPLICAR SUS LARGOS GENOMAS. PARA CONSEGUIR QUE ESTOS ORIGENES SEAN ACTIVADOS SOLO U... ver más

01/01/2016

FUNDACIO INSTITUT...

157K€

Presupuesto del proyecto: 157K€

Líder del proyecto

FUNDACIO INSTITUT D'INVESTIGACIO BIOMEDICA DE... Actividades auxiliares a la educación asociacion

TRL 4-5 | 50K€

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2016-01-01 No tenemos la información de la convocatoria

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Líder del proyecto

FUNDACIO INSTITUT D'INVESTIGACIO BIOMEDICA DE... Actividades auxiliares a la educación asociacion

TRL 4-5 | 50K€

Presupuesto del proyecto 157K€

Descripción del proyecto LA REPLICACION DEL ADN ES UN PROCESO ESENCIAL EN CUALQUIER ORGANISMO VIVO. LAS CELULAS EUCARIOTAS UTILIZAN MULTIPLES ORIGENES DE REPLICACION PARA REPLICAR SUS LARGOS GENOMAS. PARA CONSEGUIR QUE ESTOS ORIGENES SEAN ACTIVADOS SOLO UNA VEZ POR CADA CICLO CELULAR, LA ACTIVACION DE LA HELICASA REPLICATIVA ESTA DIVIDIDA EN DOS PASOS MUTUAMENTE EXCLUYENTES A LO LARGO DEL CICLO CELULAR. DURANTE G1, LOS ORIGENES SON ¿LICENCIADOS¿ Y LA FORMA INACTIVA DE LA HELICASA ES CARGADA EN EL ADN, MCM2-7 DOBLE HEXAMERO (DH). LA ENTRADA A LA FASE S DEL CICLO CELULAR CONLLEVA LA ACTIVACION DE LA HELICASA, UNA PARTE DE LOS DH SON CONVERTIDOS A LA FORMA ACTIVA O CMG (CDC45/MCM2-7/GINS). ESTA ACTIVACION PERMITE EL ENSAMBLAJE DE LA MAQUINARIA DE REPLICACION, CONOCIDO COMO REPLISOMA, Y EMPEZAR LA SINTESIS DE ADN. ESTOS DOS PASOS REGULADOS DIFERENCIALMENTE, NO SOLO ESTABLECEN LA HELICASA COMO EL PRINCIPAL MIEMBRO DE LA REGULACION DE LA REPLICACION CROMOSOMICA, SINO QUE TAMBIEN TIENEN UNA CONSECUENCIA MECANICISTA IMPORTANTE, YA NO SE PUEDE VOLVER A CARGAR EN EL ADN DURANTE LA FASE DE SINTESIS. ES POR ESTO, QUE LAS CELULAS HAN CREADO UNA SOFISTICADA RED, QUE LES PERMITE SUPERAR LOS MULTIPLES OBSTACULOS QUE SE ENCUENTRAN A LO LARGO DE LA REPLICACION GENOMICA. ESTA, INCLUYE MULTIPLES PROTEINAS ACCESORIAS PARA EL REPLISOMA Y UN ACOPLAMIENTO CON LA MAQUINARIA DE REPARACION DEL DAÑO GENOMICO, A TRAVES DEL S-PHASE CHECKPOINT. A PESAR DE TODOS ESTOS MECANISMOS CELULARES, ALGUNOS DE LOS OBSTACULOS NO PUEDEN SER SUPERADOS Y EL REPLISOMA SE COLAPSA, RESULTANDO EN UN DESENSAMBLAJE PREMATURO DE LA HELICASA. ALTERNATIVAMENTE, SI LA SINTESIS DE ADN PROCEDE, EN ULTIMA ESTANCIA DOS REPLISOMAS CONVERGERAN Y SU DESENSAMBLAJE PROCEDERA BAJO EL PROCESO NORMAL DE TERMINACION. LA INACTIVACION Y DESENSAMBLAJE DE LA HELICASA ES MUCHO MENOS CONOCIDA Y ESTUDIADA QUE SU ENSAMBLAJE Y ACTIVACION. RECIENTES ESTUDIOS PIONEROS EN LA TERMINACION HAN EMPEZADO A PONER EN EVIDENCIA QUE SE TRATA DE UN PROCESO COMPLEJAMENTE REGULADO, DONDE MULTIPLES VIAS ESTAN IMPLICADAS. REPLINATION TIENE COMO PRINCIPALES OBJETIVOS, EL DESCUBRIMIENTO Y CARACTERIZACION A NIVEL MOLECULAR, DE LAS VIAS IMPLICADAS EN EL DESENSAMBLAJE DE LOS DH Y DE CMG, BAJO CONDICIONES DE TERMINACION PREMATURAS Y NORMALES. ADEMAS SE EVALUARA LA PRESENCIA DE DICHAS VIAS PARA LOS DH QUE PROCEDAN A LA FASE DE SENESCENCIA. PARA CONSEGUIR ESTOS OBJETIVOS, SE VA A UTILIZAR UNA ESTRATEGIA REDUCCIONISTA, A DIFERENCIA DE LOS CLASICOS ESTUDIOS "IN VIVO" BASADOS EN BIOLOGIA CELULAR. RECIENTEMENTE, TODO UN GRUPO DE TECNICAS DE RECONSTITUCION HAN SIDO DESARROLLADAS Y UTILIZADAS PARA ESTUDIAR LA ACTIVACION DE LA HELICASA. YO PROPONGO UTILIZAR ESTAS TECNICAS PARA IDENTIFICAR NUEVOS FACTORES Y MODIFICACIONES POST-TRADUCCIONALES IMPLICADAS EN EL DESENSAMBLAJE DE LOS DH Y CMG EN MULTIPLES CONTEXTOS. ESPECIFICAMENTE, UTILIZAREMOS ENSAYOS SEMI-RECONSTITUIDOS. EN ESTOS, LOS DH Y CMG SON ENSAMBLADOS CON PROTEINAS PURIFICADAS EN DIFERENTES SUSTRATOS DE ADN, MIENTRAS QUE PARA SU ACTIVACION Y TERMINACION, SE UTILIZA EXTRACTO DE LEVADURA CELULAR. UNA VEZ DESARROLLADOS ESTOS ENSAYOS, NOS OFRECERAN UNA IMPRESIONANTE GRUPO DE HERRAMIENTAS MOLECULARES, CON LAS CUALES SE PROCEDERA A IDENTIFICAR Y CARACTERIZAR SISTEMATICAMENTE LAS VIAS DE DESENSAMBLAJE, A UN NIVEL DE DETALLE MOLECULAR SIN PRECEDENTES. FINALMENTE, ESTAS HERRAMIENTAS MOLECULARES VAN A CONSTITUIR LA BASE CON LA CUAL EXPLORAR NUEVAS AVENIDAS DE INVESTIGACION, MAS ALLA DE ESTE PROYECTO. EPLICACIÓN CROMOSÓMICA\DAÑO CELULAR Y CICLO CELULAR.\ESTRÉS REPLICATIVO

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