Descripción del proyecto
LA FOTOSINTESIS ES ESENCIAL PARA LAS PLANTAS Y SU INHIBICION CONTRIBUYE SUSTANCIALMENTE A LOS EFECTOS NEGATIVOS QUE ESTRESES ABIOTICOS COMO SALINIDAD O SEQUIA EJERCEN SOBRE LA PRODUCTIVIDAD AGRICOLA, PARA OPTIMIZAR LA FOTOSINTESIS ES NECESARIO MANTENER LAS CONDICIONES IONICAS DE LOS CLOROPLASTOS A TRAVES DE TRANSPORTADORES IONICOS ESPECIFICOS, A PESAR DE SU IMPORTANCIA, ESTOS TRANSPORTADORES HAN SIDO ESCASAMENTE CARACTERIZADOS, POR LO QUE EN EL PRESENTE PROYECTO PROPONEMOS LOS SIGUIENTES OBJETIVOS: 1,- ESTUDIO DEL PH ESTROMATICO EN MUTANTES T-DNA DE ARABIDOPSIS CON DISRUPCIONES EN TRANSPORTADORES DE MG+2 O CL- DEL CLOROPLASTO, UTILIZAREMOS METODOLOGIA PUESTA A PUNTO EN UN PROYECTO PREVIO QUE PERMITE MEDIR DE FORMA DINAMICA EL PH ESTROMATICO EN RESPUESTA A LA LUZ EN CLOROPLASTOS AISLADOS USANDO SONDAS FLUORESCENTES, LO QUE PERMITIO DETERMINAR QUE KEA1,2 SON ANTIPORTADORES K+/H+, ESTA NUEVA APROXIMACION ABRE LA POSIBLIDAD DE ANALIZAR LA IMPLICACION DE LOS TRANSPORTADORES IONICOS DE CLOROPLASTO EN LA HOMEOSTASIS DEL PH ESTROMATICO, ADEMAS DE LOS FLUJOS DE K+, SE HA DEMOSTRADO QUE LOS FLUJOS DE CL- Y MG2+ SON IMPORTANTES PARA EL EQUILIBRIO DE CARGAS, 2,- IDENTIFICACION DE LOS SISTEMAS DE TRANSPORTE IONICO RESPONSABLES DE LA ACUMULACION DE NA+ EN CLOROPLASTOS DE ESPECIES HALOFITAS, UN IMPORTANTE DETERMINANTE DE LA TOLERANCIA A LA SALINIDAD EN HALOFITAS ES LA CAPACIDAD DE ACUMULAR SODIO EN CLOROPLASTOS, SE COMPARARA LA ACTIVIDAD DE ANTIPORTE K+/H+ Y NA+/H+ EN CLOROPLASTOS DE LA GLICOFITA ARABIDOPSIS THALIANA Y LA HALOFITA THELLUNGIELLA PARVULA Y SE ANALIZARA LA IMPLICACION DE LOS TRANSPORTADORES KEA Y NHD EN LA ACUMULACION CLOROPLASTIDICA DE NA+ EN TELLUNGIELLA, TPKEA SE CLONARA Y EXPRESARA EN ARABIDOPSIS Y SE ESTUDIARA SU ACTIVIDAD EN CLOROPLASTOS AISLADOS, LA ACTIVIDAD DE TPNHD SE ANALIZARA EN VESICULAS INVERTIDAS DE E, COLI 3,- ESTUDIO DE LA REGULACION DE LA ACTIVIDAD H+-ATPASA DE LA MEMBRANA PLASMATICA Y LA CONCENTRACION DE K+ CITOSOLICO EN MUTANTES KEA1KEA2, HEMOS DEMOSTRADO QUE LA DISRUPCION DE LOS TRANSPORTADORES KEA1,2 DE ARABIDOPSIS AFECTA A LA HOMEOSTASIS IONICA DEL CLOROPLASTO Y EL CITOSOL, ASI EL DOBLE MUTANTE TIENE UN ESTROMA MAS ALCALINO, UN CITOSOL MAS ACIDICO Y UN POTENCIAL DE MEMBRANA MAS BAJO, PUESTO QUE EL PH CITOSOLICO Y EL POTENCIAL DE MEMBRANA ESTAN DETERMINADOS POR LA H+-ATPASA DE LA MEMBRANA PLASMATICA, PARECE PROBABLE QUE LAS CONDICIONES IONICAS DEL CLOROPLASTO GENEREN LA SEÑAL QUE REGULA ESTA ACTIVIDAD ATPASA, ESTUDIAREMOS EL ESTADO DE ACTIVACION DE LA H+-ATPASA DE LA MEMBRANA PLASMATICA EN DOBLES MUTANTES KEA1KEA2, SE DESCONOCE EL EFECTO DE KEA1,2 SOBRE LA CONCENTRACION DE POTASIO CITOSOLICO, PERO LA OBSERVACION DE QUE LOS ESTOMAS DEL DOBLE MUTANTE ESTAN MAYORITARIAMENTE CERRADOS, INDICA UNA MENOR CONCENTRACION, DETERMINAREMOS LA CONCENTRACION DE POTASIO CITOSOLICO USANDO MICROELECTRODOS SELECTIVOS,4,- CARACTERIZACION FENOTIPICA DE PLANTAS DE ARABIDOPSIS Y TOMATE CON DISRUPCIONES EN LOS GENES KEA CRECIDAS EN LUZ FLUCTUANTE, HEMOS COMENZADO A GENERAR PLANTAS DE TOMATE CON DISRUPCIONES EN EL HOMOLOGO DE KEA1,2 DE ARABIDOPSIS MEDIANTE RNAI Y CRISPR, EN ESTE PROYECTO SELECCIONAREMOS LAS LINEAS MUTANTES DE TOMATE Y ESTUDIAREMOS SUS FENOTIPOS EN CONDICIONE DE LUZ FLUCTUANTE YA QUE EL LENTO AJUSTE DEL PH ESTROMATICO EN LA TRANSICION LUZ/OSCURIDAD OBSERVADO EN MUTANTES KEA1KEA2 DE ARABIDOPSIS SUGIERE QUE QUE LOS TRANSPORTADORES KEA PUEDEN SER RELEVANTES PARA AJUSTAR LA FOTOSINTESIS A CONDICIONES DE LUZ FLUCTUANTE TRANSPORTE DE IONES\PH\CLOROPLASTO\SALINIDAD\ARABIDOPSIS\TOMATE\THELLUNGIELLA