Descripción del proyecto
EN LAS SOCIEDADES AVANZADAS LA INFERTILIDAD AFECTA A UN 15% DE LA POBLACION Y EXISTE UNA DEMANDA DE TECNICAS DE REPRODUCCION ASISITIDA DEBIDO AL HECHO DE QUE MUCHAS PAREJAS OPTAN POR POSTERGAR LA NATALIDAD HASTA EDADES AVANZADAS, ESTO INFLUYE DIRECTAMENTE SOBRE LA CALIDAD LOS GAMETOS TANTO MASCULINOS COMO FEMENINOS,EL PRESENTE PROYECTO SE PLANTEA COMO UNA CONTINUACION LOGICA DE LOS LOGROS ALCANZADOS EN DOS PROYECTOS ANTERIORES SUBVENCIONADOS POR EL MCYT EN LOS QUE SE ANALIZO EL IMPACTO DE DEL DAÑO EN EL ADN DEL ESPERMATOZOIDE EN DISTINTAS CIRCUNSTANCIAS, TALES COMO: PERIODOS DE ABSTINENCIA, SELECCION ESPERMATICA, CRIOPRESERVACION, CONTENIDO DE PROTAMINAS DE LOS ESPERMATOZOIDES, CONDICIONES DE TRANSPORTE O BIEN LA INCIDENCIA DE ESTE PARAMETRO EN DETERMINADOS CUADROS CLINICOS, EN ESTE PROYECTO SE ANALIZARAN DOS DE LAS CAUSAS QUE GENERAN DAÑO EN EL ESPERMATOZOIDE: EL ESTRES OXIDATIVO Y LA ACCION DE ENDONUCLEASAS LIBRES EN EL EYACULADO, LA HIPOTESIS DE TRABAJO ASUME QUE TANTO EL IMPACTO DEL ESTRES OXIDATIVO QUE SE PUEDE DETECTAR EN UN EYACULADO, COMO LA ACCION QUE DETERMINADAS NUCLEASAS EJERCEN SOBRE LA CALIDAD SEMINAL, TIENEN UN COMPONENTE DE DEPENDENCIA ASOCIADO AL FONDO GENETICO DEL PACIENTE,SE PLANTEAN OBJETIVOS DE CARACTER CIENTIFICO (A), DE TRANSFERENCIA TECNOLOGICA (B) Y DE APLICACION CLINICA (C) A1) IDENTIFICAR Y CUANTIFICAR DOS DE LAS PRINCIPALES CAUSAS DE DAÑO EN EL ADN ESPERMATICO: (I) EL ESTRES OXIDATIVO POR EXCESO DE ANIONES SUPEROXIDO Y (II) LA PRESENCIA DE ENZIMAS CON ACTIVIDAD CATALITICA EN LA MOLECULA DE ADN LIGADAS A TOPOISOMERASAS EN UNA MUESTRA DE 400 PACIENTES,A2) ESTABLECER CORRELACIONES ENTRE LA SITUACION REGISTRADAS DE ESTRES OXIDATIVO Y ACTIVIDAD DNASA CON EL FONDO GENETICO DE LOS PACIENTES UNA VEZ TIPIFICADOS PARA LOS SIGUIENTES GENES: GSTT, GSTM, SOD2, CAT, HOGG1, XRCC1 Y PROTAMINA 1,B1) MODIFICACAR LA METODOLOGIA EXISTENTE BAJO EL REGISTRO Y PATENTE DE METODO OXISPERM, CON LICENCIA DE EXPLOTACION DESDE LA UAB A HALOTECH DNA SL, PARA QUE PUEDA IMPLEMENTAR COMO UNA MEDIDA ESTABLE DE LOS RADICALES SUPEROXIDO DEL EJACULADO SOBRE UN SOPORTE SEMIRIGIDO, DESARROLLO DE UN KIT PROTOTIPO DE SEGUNDA GENERACION,B2)VALIDACION Y ESTUDIO COMPARATIVO DEL ENSAYO GEDSA (GRAVITY ENFORCED DIFUSSION ASSAY)) PARA LA DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DNASA EN EL EYACULADO CON LAS TECNICAS CONVENCIONALES DE ANALISIS DE ESTA ACTIVIDAD, DESARROLLO DE UN KIT PROTOTIPO DE PRIMERA GENERACION, C1) ENSAYAR UN METODO PARA MEJORAR LA SELECCION DEL ESPERMA ANTES DE LA FERTILIZACION MEDIANTE TECNICAS DE FRACCIONAMIENTO ESPERMATICO NO CONVENCIONALES TALES COMO EL SWIM-UP DIRECTO UTILIZANDO GRADIENTES DE DENSIDAD CONVENCIONALES, PERO DESCARTANDO LA CENTRIFUGACION, C2) MEJORAR LAS TECNICAS DE MANEJO DE MUESTRAS DE SEMEN DURANTE EL TRANSPORTE CONTROLANDO EL EFECTO QUE PROVOCA SOBRE LA CALIDAD SEMINAL LOS RANGOS DISCRETOS DE TEMPERATURA DE 4ºC Y 15ºC,EN AMBAS SITUACIONES EXPERIMENTALES SE PRETENDE EVALUAR EL IMPACTO Y EL CONTROL QUE SE PUEDA LOGRAR PARA MODULAR EL EFECTO DEL ESTRES OXIDATIVO Y DE LA ACTIVIDAD DNASA BIOMARCADORES\ FACTOR MASCULINO\ FRAGMENTACIÓN DNA ESPERMÁTICO\ ESTRES EXIDATIVO\ DAÑO EN EL ADN\ ANDROLOGIA\ CALIDAD SEMINAL