Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO BUSCA DESARROLLAR, CARACTERIZAR Y OPTIMIZAR APTAMEROS ESPECIFICOS FRENTE A DIANAS MOLECULARES DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C (VHC), EL VIRUS DE LA HEPATITIS B (VHB) Y EL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA HUMANA DE TIPO 1 (VIH-1), APLICABLES COMO NUEVAS HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS EN VIROLOGIA, SE UTILIZARAN COMO SONDAS DE BIO-RECONOCIMIENTO EN BIOSENSORES BASADOS EN APTAMEROS (APTASENSORES) PARA EL DIAGNOSTICO VIRAL, ENTRE ELLOS LOS QUE UTILIZAN GRAFENO MODIFICADO QUIMICAMENTE Y LOS ELECTROQUIMICOS DE FLUJO LATERAL, EN PARALELO, SU POTENCIAL TERAPEUTICO SE EVALUARA EN SISTEMAS DE CULTIVO CELULAR, ADEMAS, SE UTILIZARA UNA METODOLOGIA NANOTECNOLOGICA, LA MICROSCOPIA DE FUERZA ATOMICA (AFM), PARA CARACTERIZAR LA ESTRUCTURA NATIVA DE LOS DOMINIOS FUNCIONALES DE ARN GENOMICO DEL VHC Y SUS INTERACCIONES ARN-ARN O ARN-PROTEINA, ASI COMO PARA EVALUAR EL RENDIMIENTO DE LAS SUPERFICIES DE LOS APTASENSORES, PARA LLEVAR A CABO ESTE PROYECTO INTERDISCIPLINAR PROFUNDIZAREMOS EN EL TRABAJO PREVIO DEL GRUPO DE INVESTIGACION DEL IP, EN ESTRECHA COLABORACION CON OTROS GRUPOS,SE PERSIGUEN CUATRO OBJETIVOS ESPECIFICOS Y COMPLEMENTARIOS ENTRE SI, EL OBJETIVO 1 BUSCA SELECCIONAR IN VITRO Y CARACTERIZAR APTAMEROS DE ARN Y ADN ESPECIFICOS DE PEPTIDOS CORRESPONDIENTES A REGIONES VARIABLES DE LA PROTEINA CORE DEL VHC, LOS APTAMEROS ANTI-HCVCORE DE ALTA AFINIDAD DESARROLLADOS EN ESTE PROYECTO, JUNTO CON LOS OBTENIDOS PREVIAMENTE POR EL GRUPO DE INVESTIGACION SOLICITANTE (EN EL PROYECTO BIO2016-79618-R), SE UTILIZARAN EN ENSAYOS DE TIPO SANDWICH PARA DETECTAR ESPECIFICAMENTE VHCCORE DE LOS GENOTIPOS 1 A 4, TAMBIEN SE PROBARAN COMO SONDAS EN APTASENSORES BASADOS EN GRAFENO Y ELECTROQUIMICOS, ADEMAS, SU EFICIENCIA ANTIVIRAL SE ANALIZARA EN SISTEMAS DE CULTIVO CELULAR, CONTINUANDO LOS RESULTADOS PRELIMINARES YA OBTENIDOS,EL OBJETIVO 2 TIENE COMO OBJETIVO DESARROLLAR Y CARACTERIZAR APTAMEROS DE ARN Y ADN ESPECIFICOS FRENTE A DOS PROTEINAS RELEVANTES DEL VHB Y PEPTIDOS DERIVADOS DE ELLAS: LA PROTEINA CORE (HBCAG) Y LA PROTEINA X (HBX), LOS APTAMEROS ANTI-HBCAG DE ALTA AFINIDAD SE UTILIZARAN PARA DESARROLLAR APTASENSORES BASADOS EN GRAFENO Y ELECTROQUIMICOS, ADEMAS, SE REALIZARAN EXPERIMENTOS PRELIMINARES PARA PROBAR LOS MEJORES APTAMEROS ANTI-HBX COMO MOLECULAS ANTIVIRALES EN SISTEMAS DE CULTIVO CELULAR,EL OBJETIVO 3 PERSIGUE LA CARACTERIZACION ESTRUCTURAL/FUNCIONAL DE LOS APTAMEROS DE ADN ESPECIFICOS DE LA REGION 5'UTR DEL GENOMA DEL VIH-1, QUE SE ESTAN OBTENIENDO EN EL PROYECTO BIO2016-79618-R, Y SU COMPARACION CON LOS DE ARN (INCLUIDO EL APTAMERO DE 16 NT Y ALTAMENTE INHIBITORIO RNAPT16) PREVIAMENTE OBTENIDOS, LA ESTRUCTURA 3D DE RNAPT16 Y OTROS "APTAMEROS MINIMOS" SERA ANALIZADA EN SOLUCION MEDIANTE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR (RMN) EN EL LABORATORIO DE UNO DE NUESTROS COLABORADORES, PARALELAMENTE, LOS APTAMEROS ANTI-VIH-1-5'UTR DE ALTA AFINIDAD SE ENSAYARAN COMO INHIBIDORES DE LA PRODUCCION DE VIH-1 EN CULTIVO CELULAR, INDIVIDUALMENTE Y COMBINADOS CON DENDRIMEROS CATIONICOS,POR ULTIMO, EL OBJETIVO 4 BUSCA CARACTERIZAR LA ESTRUCTURA NATIVA DE CIERTOS DOMINIOS FUNCIONALES DEL ARN GENOMICO DEL VHC (AISLADOS Y EN COMPLEJOS ARN-ARN O ARN-PROTEINA), UTILIZANDO AFM EN COMBINACION CON NUESTRO SOFTWARE RECIENTEMENTE DESARROLLADO PARA EL ANALISIS Y AGRUPAMIENTO MORFOLOGICO EN IMAGENES AFM, ESTA TECNICA TAMBIEN SE UTILIZARA PARA CARACTERIZAR LA ESTRUCTURA Y LA FUNCIONALIDAD DE LAS SUPERFICIES BIOSENSORAS DESARROLLADAS EN LOS OBJETIVOS 1 Y 2, APTAMEROS\SELECCION IN VITRO\VHC\VHB\VIH-1\PROTEINA CORE\BIOSENSORES\GRAFENO\MICROSCOPIA DE FUERZA ATOMICA\TERAPIA ANTIVIRAL.