Descripción del proyecto
LAS PROTEINAS DE MEMBRANA PARTICIPAN EN DIFERENTES FUNCIONES FISIOLOGICAS Y SU MALFUNCIONAMIENTO ES LA PRINCIPAL CAUSA DE DIFERENTES PATOLOGIAS, ADEMAS, ALGUNOS TRANSPORTADORES DE MEMBRANA PARTICIPAN TANTO EN LA DISPOSICION COMO EN LA RESPUESTA DE MUCHOS FARMACOS YA QUE ACTUAN EN LA DISTRIBUCION DE ESTOS (YA SEA POR ACUMULACION O POR EXCRECION) EN LOS DIFERENTES TEJIDOS, POR TANTO, ES NECESARIO UN CONOCIMIENTO MAS PROFUNDO DE ESTAS PROTEINAS A NIVEL ESTRUCTURAL LO QUE IMPLICA LA DETERMINACION DE SU ESTRUCTURA ATOMICA A ALTA RESOLUCION, PRINCIPALMENTE UTILIZANDO CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X, DESAFORTUNADAMENTE, GENERAR CRISTALES DE PROTEINAS DE MEMBRANA CON SUFICIENTE CALIDAD PARA DIFRACTAR RAYOS X ES UNA TAREA ENORMEMENTE COMPLICADA DEBIDO A SU NATURALEZA, LA POCA ESTABILIDAD EN SOLUCION DE ESTAS PROTEINAS JUNTO A SU TENDENCIA A AGREGAR SON LOS GRANDES OBSTACULOS DURANTE EL PROCESO DE CRISTALIZACION, EN ESTE PROYECTO SE PRETENDE CONSTRUIR UN PROTOCOLO EXPERIMENTAL DE MEDIA A ALTA CAPACIDAD DE PRODUCCION CON EL OBJETIVO DE GENERAR Y CARACTERIZAR MUTANTES FUNCIONALES DE UNA PROTEINA DE MEMBRANA DIANA CON UNA MAYOR ESTABILIDAD EN SOLUCION Y, POR TANTO, CON MAYOR TENDENCIA A CRISTALIZAR, EN CONCRETO, SE PRETENDE GENERAR UNA BIBLIOTECA DE MUTANTES UTILIZANDO MUTAGENESIS ALEATORIA; EL PERFIL DE EXPRESION DE LOS MISMOS SE COMPROBARA DE MANERA RAPIDA UTILIZANDO LA LUMINISCENCIA DE LA GFP Y, FINALMENTE, SE CARACTERIZARA LA TERMOESTABILIDAD DE LOS MUTANTES PREVIAMENTE SELECCIONADOS UTILIZANDO TECNICAS DE DISPERSION DINAMICA DE LA LUZ, EMPEZAREMOS TRABAJANDO CON STET, UN PARADIGMA PROCARIOTA DE LA SUPERFAMILIA DE TRANSPORTADORES APC; SIN EMBARGO ESTE PROTOCOLO EXPERIMENTAL ESTA CONCEBIDO COMO UNA METODOLOGIA DE USO GENERAL PARA CUALQUIER PROTEINA DE MEMBRANA, SteT\cristalografía\mutagénesis aleatoria\high-throughput\termoestabilidad