Descripción del proyecto
ADEMAS DE POR EL POTENCIAL BIOTECNOLOGICO DE SUS ENZIMAS, THERMUS THERMOPHILUS (TTH) SE HA CONVERTIDO EN LOS ULTIMOS AÑOS EN UNO DE LOS MODELOS BIOLOGICOS FAVORITOS PARA ESTUDIAR ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LA BIOLOGIA, PRINCIPALMENTE DEBIDO A QUE EL CARACTER TERMOFILO DE SUS MACROMOLECULAS INCREMENTA LAS POSIBILIDADES DE OBTENER CRISTALES APROPIADOS PARA EL ANALISIS POR RAYOS X (EJEMPLOS PARADIGMATICOS: RIBOSOMA, DNA POLIMERASA, COMPLEJOS RESPIRATORIOS), EL GRUPO DE INVESTIGACION SOLICITANTE HA CONTRIBUIDO EN LOS ULTIMOS 10 AÑOS AL DESARROLLO DE HERRAMIENTAS GENETICAS PARA TTH QUE PERMITEN EL AISLAMIENTO DE MUTANTES PARA CONFRONTAR HIPOTESIS BASADAS EN ESTRUCTURAS O PARA SOBRE-EXPRESAR PROTEINAS PARA SU PURIFICACION, DADO QUE EN MUCHOS CASOS LA UTILIZACION DE UN HOSPEDADOR TERMOFILO ES LA UNICA FORMA DE OBTENER ENZIMAS TERMOESTABLES BIEN PLEGADAS Y ACTIVAS, DOS SON LOS PRINCIPALES OBJETIVOS DE ESTE PROYECTO, POR UN LADO, QUEREMOS CONTINUAR NUESTRO ANALISIS DEL EQUIPO DE GENES DE DESNITRIFICACION CODIFICADOS POR DOS AGRUPAMIENTOS TRANSFERIBLES HORIZONTALMENTE (HGT) QUE CODIFICAN LA UTILIZACION DE NITRATO (NCE) Y NITRITO O NO (AGRUPAMIENTO NIR-NOR) COMO ACEPTORES DE ELECTRONES (ISLAS DE DESNITRIFICACION), ADEMAS DE POR ESTA CAPACIDAD PARA SU TRANSFERENCIA HORIZONTAL, EL SISTEMA OBJETO DE ESTUDIO PRESENTA PECULIARIDADES QUE HACEN MUY INTERESANTE SU ESTUDIO, INCLUIDAS UN NUEVO TIPO DE ENZIMA BIFUNCIONAL REDUCTASA DE NITRATO/TRANSPORTADOR DE ELECTRONES (NAR), UN NUEVO TIPO DE NADH DESHIDROGENASAS RESPIRATORIA (NRC), O NUEVOS SISTEMAS SENSORES (PARA LA DETECCION DE OXIGENO Y DE OXIDOS DE NITROGENO), EN ESTE PROYECTO PROPONEMOS EL ANALISIS DE LOS SISTEMAS SENSORES DE NITRATO, NITRITO Y NO Y LA SOBREPRODUCCION DE NOR Y DE UN PROBABLE SENSOR DE NITRATO PARA SU CRISTALIZACION Y ESTUDIO ESTRUCTURAL (EN COLABORACION CON GRUPOS ESPECIALIZADOS), POR OTRO LADO, QUEREMOS ANALIZAR EL POSIBLE PAPEL DE NUEVOS SISTEMAS DE INMUNIDAD FRENTE A ACIDOS NUCLEICOS INVASORES ¿POR TANTO FRENTE A LA HGT- UTILIZANDO LAS ISLAS DE DESNITRIFICACION COMO MODELO, LOS SISTEMAS QUE ANALIZAREMOS SON (I) EL DENOMINADO CRISPR-CAS, QUE HA SIDO IMPLICADO EN LA DEFENSA FRENTE A VIRUS Y (II) LA PROTEINA PAGO DE TTH, UN HOMOLOGO DE LA PROTEINA ARGONAUTA DE EUCARIOTAS QUE ESTA SIENDO EMPLEADA COMO MODELO PARA ANALIZAR LOS MECANISMOS DE IRNA EN EUCARIOTAS, PRETENDEMOS ESTUDIAR LA DISTRIBUCION DE AMBOS SISTEMAS ENTRE DISTINTAS CEPAS DE TTH, OBTENER MUTANTES DE AMBOS Y ANALIZAR SU POSIBLE IMPLICACION EN LA RESISTENCIA A LA HGT MOSTRADA POR ALGUNOS AISLADOS, ADICIONALMENTE, PRETENDEMOS PURIFICAR EL COMPLEJO DE PROTEINAS CAS PARA PROCEDER A SU CRISTALIZACION (TAMBIEN EN COLABORACION) E IDENTIFICAR LAS PROTEINAS Y/O ACIDOS NUCLEICOS QUE INTERACCIONAN CON PAGO,