Descripción del proyecto
LA ENCINA (QUERCUS ILEX) Y EL CASTAÑO EUROPEO (CASTANEA SATIVA) SON DOS ESPECIES MUY POLIVALENTES EN CUANTO A SUS APROVECHAMIENTOS Y DE GRAN RELEVANCIA ECOLOGICA, ECONOMICA Y CULTURAL EN LA PENINSULA IBERICA. LA FALTA DE REGENERACION NATURAL, EL ENVEJECIMIENTO DE LOS ARBOLES, EL ABANDONO DE PRACTICAS SILVICOLAS, Y SOBRE TODO, LAS ENFERMEDADES DE LA SECA (ENCINA) Y DE LA TINTA (CASTAÑO), CAUSADAS PRINCIPALMENTE POR PHYTOPHTHORA CINNAMOMI (PC), SON LOS PRINCIPALES FACTORES QUE HAN CONTRIBUIDO A LA REDUCCION DRASTICA DE SUS POBLACIONES. ADEMAS, EN LOS ULTIMOS AÑOS, SON NUMEROSAS LAS INVESTIGACIONES QUE HAN RELACIONADO LA MAYOR INCIDENCIA DE ESTAS ENFERMEDADES CON EL CAMBIO CLIMATICO.POR ESTE MOTIVO, EL PRIMER OBJETIVO DEL PROYECTO SERA GENERAR GENOTIPOS DE AMBAS ESPECIES TOLERANTES A PC Y A ESTRES HIDRICO APLICANDO, POR PRIMERA VEZ EN ESPAÑA, LA SELECCION MULTIVARIETAL FORESTAL. PARA ELLO, PROGENIES DE ARBOLES TOLERANTES AL OOMICETO Y AL ESTRES HIDRICO DE AMBAS ESPECIES SERAN CLONADAS MEDIANTE EMBRIOGENESIS SOMATICA. LAS LINEAS EMBRIOGENICAS OBTENIDAS SERAN CRIOCONSERVADAS MIENTRAS SE REALIZA UNA EVALUACION DE SU TOLERANCIA CON MARCADORES MOLECULARES Y/O TEST DE TOLERANCIA EX VITRO QUE PERMITA FINALMENTE LA SELECCION DE LAS LINEAS TOLERANTES, DE TAL MANERA QUE SOLO SE RECUPERARAN AQUELLAS QUE MUESTREN TOLERANCIA, DESECHANDOSE LAS OTRAS.EL SEGUNDO OBJETIVO DEL PROYECTO PRETENDE GENERAR PLANTAS EDITADAS DE CASTAÑO UTILIZANDO CRISPR/CAS9. ESTA HERRAMIENTA, QUE SE HA DESARROLLADO DE MANERA VERTIGINOSA EN LOS ULTIMOS AÑOS, PERMITIRA COMPLEMENTAR LOS PROGRAMAS DE MEJORA DE ESTA ESPECIE, DE UNA FORMA MAS RAPIDA Y PRECISA QUE UTILIZANDO LAS TECNICAS DE MODIFICACION GENETICA USADAS CON ANTERIORIDAD. EN PRIMER LUGAR, SE TRATARA DE DETERMINAR LAS CONDICIONES IDONEAS PARA LA EDICION GENETICA UTILIZANDO COMO MARCADOR LA MUTACION DEL GEN DE LA FITOENO DESATURASA (PDS), DE MANERA QUE SI SE LOGRA LA EDICION OBTENDREMOS PLANTAS ALBINAS DE CASTAÑO. UNA VEZ DEFINIDAS LAS MEJORES CONDICIONES SE ABORDARA LA EDICION GENETICA DEL GEN PRM4 CUYO SILENCIAMIENTO MEDIANTE CRISPR/CAS9 INCREMENTA LA TOLERANCIA A ENFERMEDADES CAUSADAS POR HONGOS Y OOMICETOS. A NIVEL DEL PRESENTE PROYECTO, SE PRETENDE GENERAR CONOCIMIENTO SOBRE LA APLICACION DE ESTA HERRAMIENTA EN LA MEJORA DEL CASTAÑO, PARA QUE MAS TARDE PUEDA SER APLICADO EN LA EDICION DE OTRAS FAGACEAS.CON EL PROPOSITO DE OBTENER UNA PRODUCCION A GRAN ESCALA DE PLANTAS TOLERANTES A PARTIR DE LAS LINEAS EMBRIOGENICAS Y DE LOS BROTES AXILARES DE ENCINA, EL TERCER OBJETIVO DEL PROYECTO SERA, POR UNA PARTE, INVESTIGAR LA APLICACION DE SISTEMAS DE INMERSION TEMPORAL QUE OPTIMICEN LAS ETAPAS DE PROLIFERACION Y GERMINACION DE LOS EMBRIONES SOMATICOS, Y POR OTRA, LA OPTIMIZACION DE LA ETAPA DE ENRAIZAMIENTO DE LOS BROTES AXILARES DERIVADOS DE ARBOLES Y PLANTAS TOLERANTES A PC.POR ULTIMO, TRATAREMOS DE ENCONTRAR ALTERNATIVAS TECNOLOGICAS A LA CONSERVACION EN NITROGENO LIQUIDO QUE SIMPLIFIQUEN Y ABARATEN EL PROCESO DE CRIOCONSERVACION DE LOS EMBRIONES SOMATICOS. PARA ELLO, SE ANALIZARA LA CONSERVACION DE EMBRIONES SOMATICOS EN ULTRACONGELADORES A -80ºC APLICANDO DIFERENTES TRATAMIENTOS DE CRIOPROTECION. TAMBIEN SE INVESTIGARA LA APLICACION DEL ALMACENAMIENTO EN FRIO (4ºC) PARA CONSERVAR LOS CULTIVOS DE BROTES AXILARES DE ENCINA TOLERANTES A PC. ESTE TIPO DE PRESERVACION ES UNA MANERA SIMPLE Y ECONOMICA DE CONSERVACION A MEDIO PLAZO DE CULTIVOS DE BROTES ESTABLECIDOS IN VITRO. ASTANEA SATIVA\TINTA\SISTEMAS DE INMERSION TEMPORAL\SINDROME DE LA SECA\SELECCION MULTIVARIETAL\QUERCUS ILEX\MICROPROPAGACION\EMBRIOGENESIS SOMATICA\CRISPR/CAS9\CONSERVACION