Descripción del proyecto
LA EPIDEMIA DE TRISTEZA (CITRUS TRISTEZA VIRUS, CTV) HA PRODUCIDO EN ESPAÑA EL DECAIMIENTO Y MUERTE DE ~50 MILLONES DE ARBOLES INJERTADOS SOBRE NARANJO AMARGO, Y HA OBLIGADO A RECONVERTIR LA CITRICULTURA HACIA EL USO DE PATRONES TOLERANTES AL DECAIMIENTO PERO DE PEORES CUALIDADES AGRONOMICAS QUE EL NARANJO AMARGO, ESTA MEDIDA SERA INSUFICIENTE EN EL FUTURO PARA CONTROLAR LAS CEPAS VIRULENTAS DE CTV CAUSANTES DE DAÑOS EN VARIEDADES COMERCIALES CON INDEPENDENCIA DEL PATRON, CUYA INCIDENCIA PARECE AUMENTAR, EL CONTROL DE ESTAS CEPAS IMPLICA EVITAR SU PROPAGACION EN VIVEROS (O CAMPO) O IMPLEMENTAR LA PROTECCION CRUZADA CON CEPAS ASINTOMATICAS DEL VIRUS, MEDIDAS QUE REQUIEREN METODOS RAPIDOS Y FIABLES QUE DISCRIMINEN AMBOS TIPOS DE CEPAS, PARA ELLO, ES NECESARIO 1) DELIMITAR PREVIAMENTE LOS MOTIVOS DE SECUENCIA DE CTV RESPONSABLES DE LA INDUCCION DE LOS DISTINTOS SINDROMES, 2) IMPLEMENTAR METODOS ADECUADOS PARA DISCRIMINAR LAS VARIANTES VIRULENTAS Y NO VIRULENTAS EN LA POBLACION VIRAL Y 3) CONOCER LAS INTERACCIONES CTV/HUESPED PARA PODER MANIPULARLAS EN EL FUTURO Y EVITAR LOS DAÑOS INDUCIDOS POR EL VIRUS EN CITRICOS, PARA ABORDAR EL PRIMER OBJETIVO HAY QUE UTILIZAR UN SISTEMA GENETICO EFICIENTE DE CTV, BASADO EN CLONES INFECCIOSOS, QUE PERMITA MANIPULAR SU GENOMA Y EXAMINAR LOS EFECTOS DE ESTOS CAMBIOS EN LA EXPRESION DE SINTOMAS, EN NUESTRO EQUIPO SE HA DESARROLLADO UN NUEVO SISTEMA GENETICO BASADO EN LA AGROINFECCION SISTEMICA DE N, BENTHAMIANA CON VECTORES BINARIOS PORTADORES DEL GENOTIPO CTV-T36 (FLORIDA), QUE PRODUCE SUFICIENTES VIRIONES INFECCIOSOS PARA INOCULAR MECANICAMENTE CITRICOS Y OBSERVAR LOS SINTOMAS, SIN EMBARGO, ES NECESARIO UNIVERSALIZAR ESTE SISTEMA (FUNCIONAL SOLO CON T36) PARA UTILIZARLO CON AISLADOS ESPAÑOLES DE CARACTERISTICAS PATOGENICAS DIFERENTES A T36 Y ASI ANALIZAR LOS DISTINTOS DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD VIRALES, EN ESTE PROYECTO SE PRETENDE: I) OPTIMIZAR EL SISTEMA GENETICO DESARROLLADO PARA CTV-T36 EN N, BENTHAMIANA, II) ADAPTARLO AL MENOS A UN GENOTIPO VIRULENTO ESPAÑOL PREVIAMENTE SECUENCIADO, OBTENIENDO CLONES INFECCIOSOS O MINIREPLICONES DE ESTE, Y III) SINTETIZAR CLONES HIBRIDOS EN LOS QUE SE SUSTITUYAN REGIONES GENICAS HOMOLOGAS ENTRE AISLADOS VIRULENTOS Y NO VIRULENTOS Y ENSAYAR SU EFECTO EN LA INDUCCION DE SINTOMAS EN CITRICOS, ADEMAS, SE ANALIZARAN POSIBLES CAMBIOS EN LA POBLACION DEL VIRUS EN SU PASO POR N, BENTHAMIANA, UN HUESPED NO NATURAL DE CTV, QUE PODRIA AFECTAR SU PATOGENICIDAD EN CITRICOS, CON RESPECTO AL SEGUNDO OBJETIVO, RECIENTEMENTE HEMOS DESARROLLADO UN METODO SENSIBLE QUE DISCRIMINA Y CUANTIFICA LAS CEPAS VIRULENTAS/NO VIRULENTAS DE LA TRISTEZA, EN ESTE PROYECTO SE PRETENDE: I) VALIDAR ESTA TECNICA CON UN AMPLIO PANEL DE AISLADOS DE CTV DE COLECCIONES INTERNACIONALES Y DE CAMPO, II) ENSAYARLA EN EXPERIMENTOS DE PROTECCION CRUZADA QUE ESTAN EN CURSO, Y III) SI SE IDENTIFICA ALGUN DETERMINANTE GENETICO DE CTV IMPLICADO EN LA INDUCCION DE SINTOMAS SEVEROS COMO LOS DE ACANALADURAS EN LA MADERA DE NARANJO DULCE Y POMELO, IMPLEMENTAR UN NUEVO METODO DE DISCRIMINACION DE CEPAS VIRULENTAS, FINALMENTE, SE ABORDARA UN NOVEDOSO ESTUDIO DE LAS INTERACCIONES BASICAS CTV/HUESPED EN EL SISTEMA EXPERIMENTAL DE N, BENTHAMIANA (U OTRO SISTEMA SENCILLO) PARA EXTRAPOLARLAS POSTERIORMENTE A CITRICOS, ESTE CONOCIMIENTO SERA NECESARIO EN EL FUTURO PARA PODER MODIFICAR ESTAS INTERACCIONES Y HACERLAS MENOS DAÑINAS PARA EL HUESPED, Y EN EL CASO DEL NARANJO AMARGO PODRIA PERMITIR SU RECUPERACION COMO PATRON,