Descripción del proyecto
EL GENERO ARCOBACTER HA ADQUIRIDO IMPORTANCIA EN LOS ULTIMOS AÑOS YA QUE SUS MIEMBROS PUEDEN ACTUAR COMO POTENCIALES ENTEROPATOGENOS EMERGENTES Y/O COMO AGENTES ZOONOTICOS, SIN EMBARGO, LOS CONOCIMIENTOS ACERCA DE SU BIOLOGIA Y EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR SON ESCASOS,NUESTRA HIPOTESIS DE PARTIDA ES QUE LAS TECNICAS Y HERRAMIENTAS MOLECULARES PERMITIRAN IDENTIFICAR EL FACTOR DE PELIGRO QUE REPRESENTA LA PRESENCIA DE ARCOBACTER EN UN DETERMINADO TIPO DE ALIMENTO, BAJO ESTA PERSPECTIVA NOS PLANTEAMOS COMO PRIMER OBJETIVO GENERAL ESTUDIAR LA PREVALENCIA DE ARCOBACTER EN MUESTRAS DE ALIMENTOS DE ORIGEN ANIMAL DESTINADOS AL CONSUMO HUMANO Y DE AGUAS SUPERFICIALES, ASI COMO LA CARACTERIZACION GENOTIPICA MEDIANTE MLST, CON EL FIN DE ESTABLECER POSIBLES RELACIONES FILOGENETICAS Y EVALUAR EL POSIBLE PAPEL DE LA TRANSFERENCIA HORIZONTAL DE MATERIAL GENETICO EN LA DIVERSIDAD GENETICA DE ESTE GENERO,EL SEGUNDO OBJETIVO GENERAL VA ENCAMINADO A LA IDENTIFICACION DE GENES IMPLICADOS EN LA ADHERENCIA A SUPERFICIES INERTES MEDIANTE EL ESTUDIO DE GENES QUE PRESENTEN HOMOLOGIA CON GENES DE OTRAS CAMPILOBACTERIAS TAMBIEN RELACIONADOS CON LA ADHERENCIA, PARA DETERMINAR LA FUNCION ESPECIFICA DE LOS GENES SELECCIONADOS SE ANALIZARAN CEPAS MUTANTES KNOCKOUT (PERDIDA COMPLETA DE LA FUNCION GENICA) Y SUS RESPECTIVAS CEPAS MUTANTES COMPLEMENTADAS (RESTABLECIMIENTO DE DICHA FUNCION), PARA LA COMPLEMENTACION DE LOS MUTANTES, SERA NECESARIO CONSTRUIR UN VECTOR LANZADERA ARCOBACTER-E, COLI, VECTOR CAPAZ DE REPLICARSE AUTONOMAMENTE Y DE MANTENERSE ESTABLE EN AMBOS HOSPEDADORESOBJETIVOS ESPECIFICOS:OBJETIVO 1, DETERMINAR LA FRECUENCIA DE AISLAMIENTO DE LAS DISTINTAS ESPECIES DE ARCOBACTER EN MUESTRAS DE ORIGEN ALIMENTARIO Y AMBIENTAL,OBJETIVO 2, CONFECCIONAR UNA COLECCION DE CEPAS DE ARCOBACTER QUE INCLUYA AISLAMIENTOS NO CLONALES, SEGUN GENOTIPIFICACION POR ERIC/PCR,OBJETIVO 3, CARACTERIZAR GENOTIPICAMENTE POR MLST LAS CEPAS NO CLONALES Y ESTABLECER SUS RELACIONES FILOGENETICAS,OBJETIVO 4, RELACIONAR LA CAPACIDAD DE ADHERENCIA SOBRE SUPERFICIES INERTES CON LA PRESENCIA DE GENES RELACIONADOS CON ELLA COMO FLAAB, LUXS, FLIS, CJ0688, CADF, SPOT O WAAF,OBJETIVO 5, CONSTRUIR MUTANTES KNOCKOUT PARA CEPAS QUE COMBINEN CAPACIDAD DE ADHERENCIA CON PRESENCIA DE GENES DE ADHERENCIA PUTATIVOS, OBJETIVO 6, CONSTRUIR UN VECTOR LANZADERA ARCOBACTER-E, COLI,OBJETIVO 7, RESTITUIR LA FUNCION DE LOS GENES INACTIVADOS EN LOS MUTANTES KNOCKOUT MEDIANTE COMPLEMENTACION GENICA UTILIZANDO EL VECTOR LANZADERA, OBJETIVO 8, DETERMINAR LA FUNCION DE LOS GENES DE ADHERENCIA PUTATIVOS DE ARCOBACTER MEDIANTE CARACTERIZACION FENOTIPICA DE LOS MUTANTES KNOCKOUT Y SUS RESPECTIVOS MUTANTES COMPLEMENTADOS,LA CONSECUCION DE ESTOS OBJETIVOS PERMITIRA INCREMENTAR EL CONOCIMIENTO DE ARCOBACTER Y POSIBILITARA EL ESTABLECIMIENTO DE MODELOS PROBABILISTICOS FIABLES PARA EL CONTROL DE LAS ZOONOSIS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS, CON ELLO SE CONTRIBUIRA A LA GESTION Y COMUNICACION DEL RIESGO AL PROPORCIONAR DATOS EPIDEMIOLOGICOS QUE PERMITAN PREVER SITUACIONES DE PELIGRO Y ESTABLECER ESTRATEGIAS DE PREVENCION, REDUCIENDO CON ELLO EL RIESGO SOBRE LA POBLACION, POR OTRA PARTE, LA CONSTRUCCION EXITOSA DE UN VECTOR LANZADERA PROPORCIONARA UNA UTIL HERRAMIENTA PARA MANIPULAR GENETICAMENTE ARCOBACTER, CONTRIBUYENDO A PROPORCIONAR VALIOSA INFORMACION SOBRE FUNCIONES GENICAS Y DILUCIDAR LOS MECANISMOS DE PATOGENESIS EN ESTE ENTEROPATOGENO EMERGENTE, ARCOBACTER\ALIMENTOS\PREVALENCIA\GENOTIPIFICACIÓN\MLST\FACTORES DE ADHERENCIA