Descripción del proyecto
EN PROYECTOS ANTERIORES, SE REALIZO LA CARACTERIZACION BIOQUIMICA Y MOLECULAR DE UNA ESTEROL ESTERASA SECRETADA POR OPHIOSTOMA PICEAE. LA ENZIMA HIDROLIZA EFICAZMENTE MEZCLAS DE TRIGLICERIDOS Y ESTERES DE ESTEROLES DE EXTRAIBLES DE MADERAS Y PUEDE REDUCIR LOS PROBLEMAS DE DEPOSITOS GENERADOS POR ESTOS COMPUESTOS, DURANTE LA PRODUCCION DE PASTA DE PAPEL. LA COMPARACION ENTRE LA ACTIVIDAD DE VARIAS LIPASAS Y ESTERASAS COMERCIALES Y LA ENZIMA DE O. PICEAE, MOSTRO QUE ESTA ES MEJOR HIDROLIZANDO TRIGLICERIDOS Y ESTERES DE P-NITROFENOL Y COLESTEROL, EN PRESENCIA DE DETERGENTES. ADEMAS, LA ENZIMA, EXPRESADA EN P. PASTORIS, TIENE MAS EFICACIA CATALITICA QUE LA ENZIMA NATIVA (~ X10), HIDROLIZANDO TODOS LOS SUSTRATOS ENSAYADOS. ESTA MAYOR EFICACIA SE EXPLICA POR LA PRESENCIA DE 6-8 AAS MAS EN EL N-TERMINAL DE LA PROTEINA, QUE PROCEDEN DEL MAL PROCESAMIENTO DEL PEPTIDO SEÑAL EN EL VECTOR UTILIZADO PARA SU CLONACION, QUE AFECTAN SU ESTADO DE AGREGACION Y HACEN QUE SEA MAS SOLUBLE. LA ENZIMA DE O. PICEAE, AL IGUAL QUE LAS LIPASAS, PUEDE LLEVAR A CABO REACCIONES DE SINTESIS EN MEDIOS ORGANICOS. RECIENTEMENTE SE HA DEMOSTRADO QUE PUEDE ESTERIFICAR FITOESTEROLES LIBRES Y ES MAS EFICAZ QUE LA LIPASA DE C. RUGOSA, YA QUE SE REQUIEREN MENORES DOSIS DE ENZIMA Y TIEMPOS DE REACCION. EL CONSUMO DE ESTERES DE FITOESTEROLES CONTRIBUYE A REDUCIR EL COLESTEROL, POR LO QUE ESTOS RESULTADOS SE RECOGIERON EN UNA PATENTE QUE PROPONE UTILIZAR LA ENZIMA DE O. PICEAE PARA LA SINTESIS DE ESTERES DE ESTEROLES A PARTIR DE UN EXTRACTO NATURAL CON FITOESTEROLES LIBRES, COMO ALTERNATIVA AL PROCESO QUIMICO. ADEMAS, LA ESTEROL ESTERASA DE O. PICEAE HIDROLIZA POLIVINIL ACETATO A POLIVINIL ALCOHOL, POLIMERO MAS SOLUBLE Y BIODEGRADABLE, UTILIZADO EN NUMEROSAS APLICACIONES. ESTO, UNIDO A QUE LA ENZIMA PUEDE LLEVAR A CABO REACCIONES DE SINTESIS, SUGIERE QUE PODRIA UTILIZARSE TANTO EN LA PRODUCCION COMO EN EL RECICLADO DE POLIESTERES, PROCESOS QUE ACTUALMENTE SE LLEVAN A CABO UTILIZANDO CATALIZADORES QUIMICOS. TODOS LOS RESULTADOS INDICAN QUE NOS ENCONTRAMOS ANTE UN CATALIZADOR ENZIMATICO ROBUSTO, QUE PODIA TENER DIFERENTES APLICACIONES BIOTECNOLOGICAS. SIN EMBARGO, EXISTEN TODAVIA CUELLOS DE BOTELLA PARA PODER COMPROBAR SU EFICACIA A NIVEL PILOTO O INDUSTRIAL. ALGUNOS DE ESTOS INCONVENIENTES SE TRATARAN DE RESOLVER EN EL PROYECTO SOLICITADO EN EL QUE SE PROPONE: I) LA EXPRESION DE LA ENZIMA EN HOSPEDADORES GRAS, UTILIZADOS A NIVEL INDUSTRIAL, CON EL FIN DE OBTENER MAYORES NIVELES DE ENZIMA Y PODER UTILIZARLA EN APLICACIONES RELACIONADAS CON EL SECTOR ALIMENTARIO; II) CARACTERIZAR LAS ENZIMAS RECOMBINANTES, COMPROBANDO QUE MANTIENEN SUS PROPIEDADES CATALITICAS; III) DETERMINAR LA ESTRUCTURA DE LA PROTEINA, PARA PROFUNDIZAR EN SUS DIFERENCIAS CON LAS LIPASAS Y TRATAR DE ENTENDER SU EFICACIA EN LA HIDROLISIS Y SINTESIS DE ESTERES DE COLESTEROL; IV) COMPLETAR EL ESTUDIO DE LA SINTESIS DE FITOESTEROLES CON APLICACIONES EN EL SECTOR ALIMENTARIO Y EXPLORAR NUEVAS APLICACIONES EN LA SINTESIS E HIDROLISIS DE POLIESTERES; Y V) BUSCAR NUEVAS ESTEROL ESTERASAS, SEMEJANTES A LA DE O. PICEAE, UTILIZANDO BASES DE DATOS ELECTRONICAS PARA SELECCIONAR LAS ENZIMAS FUNGICAS, Y METAGENOTECAS BACTERIANAS PARA LAS DE PROCARIOTAS (ESTAS CEDIDAS POR INVESTIGADORES DE UN PROYECTO CONSOLIDER, CARTA ADJUNTA). PARA REALIZAR EL PROYECTO SE CUENTA CON LA EXPERIENCIA DE GRUPOS EXPERTOS DEL CSIC EN CRISTALOGRAFIA Y SECRECION DE ENZIMAS (CARTAS ADJUNTAS) Y CON EPOS DE EMPRESAS: BIOPOLIS Y PEVESA.