Descripción del proyecto
EL PROYECTO DE INVESTIGACION SE HA CONCEBIDO CON LA IDEA DE INVESTIGAR EL METABOLISMO DE ESPECIES DE OXIGENO Y NITROGENO REACTIVO (ROS Y RNS), LAS FUNCIONES DE LOS SISTEMAS ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS (SAE) Y LAS DE LOS PEROXISOMAS, EN DISTINTAS ETAPAS DE LA MADURACION DE LOS FRUTO DE OLIVO (OLEA EUROPAEA), EN LA POSTCOSECHA Y EN CONDICIONES DE ESTRES POR BAJAS TEMPERATURAS. NUESTRA HIPOTESIS DE PARTIDA, AVALADA POR ALGUNOS DATOS PRELIMINARES, ES QUE EL METABOLISMO DE ROS/RNS ES TAMBIEN ACTIVO EN FRUTOS DE OLIVO, Y QUE LOS SAE, Y EL METABOLISMO PEROXISOMAL DESEMPEÑAN FUNCIONES FUNDAMENTALES, NO CARACTERIZADAS HASTA AHORA, EN LA MADURACION DE LOS FRUTOS DE OLIVO Y SU ADAPTACION A LAS CONDICIONES DE ESTRES. ASIMISMO, LA ACTIVIDAD DE LOS ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS (AE) Y LA PRESENCIA DE ROS ASOCIADA A LA MADURACION Y ESTRES VEGETAL PODRIAN TENER ALGUNA INFLUENCIA EN LOS PARAMETROS DE CALIDAD DEL ACEITE DE OLIVA. NUESTRA INVESTIGACION ACTUAL (PROYECTO INTRAMURAL ESPECIAL IN 2010 REF 200940I006 DE MI RECIENTE INCORPORACION COMO INVESTIGADOR CIENTIFICO AL CSIC) NOS HA PROPORCIONADO DATOS PRELIMINARES SOBRE SAE Y LA PRESENCIA DE PEROXISOMAS EN TEJIDOS JOVENES Y MADUROS DE FRUTOS DE OLIVO. SE LLEVARA A CABO EL ESTUDIO DE LOS AE EN FRUTOS DE OLIVO: SUPEROXIDO DISMUTASAS, CATALASA, ASCORBATO PEROXIDASA, MONODESHIDROASCORBATO REDUCTASA, DESHIDROASCORBATO REDUCTASA, GLUTATION REDUCTASA, GLUTATION PEROXIDASA, TIOREDOXINAS Y DESHIDROGENASAS (DH) GENERADORAS DE NADPH, CONCRETAMENTE GLUCOSA-6-FOSFATODH, 6-FOSFOGLUCONATODH, ISOCITRATODH Y ENZIMA MALICA. SE LLEVARAN A CABO ANALISIS DE ACTIVIDADES ENZIMATICAS, WESTERNBLOT Y EXPRESION GENICA (RT- PCR CUANTITATIVA) DE ESTOS AE EN LOS FRUTOS EN 3 FASES DEL DESARROLLO (VERDE JOVEN, ENVERO Y FINAL DE LA MADURACION). TAMBIEN SE ESTUDIARA EL PAPEL DE LOS SAE DE FRUTOS DE OLIVO EN EL PERIODO DE POSTCOSECHA Y EN EL ESTRES DE LOS FRUTOS POR BAJAS TEMPERATURAS (5ºC).SE INVESTIGARA EL METABOLISMO DE ROS Y RNS EN FRUTOS DE OLIVO DURANTE LA MADURACION, POSTCOSECHA Y ESTRES POR FRIO. SE ESTUDIARA LA PRODUCCION DE SUPEROXIDO, H2O2 Y NO EN CORTES DE FRUTOS DE OLIVO, ASI COMO SU DISTRIBUCION SUBCELULAR, USANDO TECNICAS ESPECIFICAS DE MICROSCOPIA ELECTRONICA Y DE ANALISIS DE IMAGEN POR MICROSCOPIA CONFOCAL LASER (CLSM). SE LLEVARA ACABO LA CARACTERIZACION DE LOS ORGANULOS SUBCELULARES PEROXISOMALES AISLADOS DE FRUTO DE OLIVO DURANTE DIFERENTES FASES DE DESARROLLO, POSTCOSECHA Y ESTRES POR BAJA TEMPERATURA. SE ESTUDIARA EL METABOLISMO PEROXISOMAL, SAE, PRODUCCION DE ROS Y RNS Y SE REALIZARAN ESTUDIOS DE ULTRAESTRUCTURA (POR MICROSCOPIA ELECTRONICA). ESTE APARTADO SE COMPLETARA CON UN ABORDAJE PROTEOMICO QUE PERMITIRA LA IDENTIFICACION DE PROTEINAS QUE SE EXPRESEN DE MANERA DIFERENCIAL ENTRE VARIEDADES Y DURANTE LA MADURACION. ESTA APROXIMACION COMPLEMENTARA LOS ESTUDIOS CON ANTIOXIDANTES ENZIMATICOS, Y POSIBLEMENTE PROPORCIONE NUEVAS RUTAS METABOLICAS DE INTERES AGRONOMICO. CON OBJETO DE ABUNDAR EN LAS POSIBILIDADES DE TRANSFERENCIA DE TECNOLOGIA, SE PROPONE CORRELACIONAR EL CONTENIDO Y ACTIVIDAD DE LOS AE CON PARAMETROS DE CALIDAD Y RENDIMIENTO EXTRACTIVO DEL ACEITE DE OLIVA. TAMBIEN SE INVESTIGARA LA PRESENCIA DE ESTOS ANTIOXIDANTES EN SUBPRODUCTOS DE OBTENCION DEL ACEITE DE OLIVA CON OBJETO DE GENERAR UN MAYOR VALOR AÑADIDO EN ESTOS SUBPRODUCTOS. ESTAS ACCIONES APLICADAS HAN SIDO SUGERIDAS POR NUESTRAS EPO (PULEVA FOOD AND KOIPE SA). NTIOXIDANTES ENZIMATICOS\ACEITE OLIVA\CALIDAD\FRIO\ESTRES\MADURACION\PEROXISOMES\RNS\ROS