Descripción del proyecto
ESTE PROYECTO ES LA CONTINUACION LOGICA DE LOS PROYECTOS ANTERIORES E-RTA2013-00020 Y RTA2017-00061 EN LA QUE SE PLANTEARON Y RESOLVIERON LOS OBJETIVOS SIGUIENTES: 1) CARACTERIZACION DE LOS GENES CANDIDATOS DE RESISTENCIA A TOLCNDV EN MELON Y CALABACIN, 2) IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE RESISTENCIAS A CGMMV EN PEPINO. Y 3) DESARROLLO DE NANOCOMPOSITES CON DSRNA PARA EL CONTROL DE TOCLNDV Y CGMMV. COMO RESULTADO, SE HAN IDENTIFICADO GENES CANDIDATOS DE RESISTENCIA A TOLCDV EN MELON (ROMAN ET AL., 2019), SE HAN SELECCIONADO ACCESIONES DE PEPINO CON RESISTENCIA A CGMMV (CRESPO ET AL., 2018); SE HAN SENTADO LAS BASES DE LA PLATAFORMAS CUCURBITA TILLING Y ECOTILLING QUE NOS PERMITIRAN EL CRIBADO DE LA DIVERSIDAD NATURAL E INDUCIDA PARA ESTUDIOS FUNCIONALES; SE HA OBTENIDO UN SISTEMA DE EXPRESION IN VITRO DE DSRNAS PARA CGMMV Y TOLCNDV; SE HA PUESTO A PUNTO UN SISTEMA DE SINTESIS IN VIVO (EN ESCHERICHIA COLI) QUE EXPRESA DSRNA DE FORMA CONSTITUTIVA, INDUCIDA O AMBOS DE FORMA SIMULTANEA, RINDIENDO GRANDES CANTIDADES DE DSRNA (DELGADO AND VELASCO, 2021). SE HAN CARACTERIZADO FISICOQUIMICAMENTE DOS TIPOS DE NANOPARTICULAS (NP), LDH Y HAP, QUE HEMOS DEMOSTRADO QUE UNEN ACIDOS NUCLEICOS, Y EN PARTICULAR DSRNA, CON ALTA EFICIENCIA, FORMANDO NANOCOMPOSITES. HEMOS CARACTERIZADO MOLECULARMENTE LA INTERACCION DSRNA-NANOPARTICULAS. ADEMAS, HEMOS OBSERVADO QUE LOS DSRNA DERIVADOS DE LOS GENES CP Y MP DE CGMMV HAN DEMOSTRADO QUE CONTROLAN EL VIRUS EN PEPINO Y SE ESTA EVALUANDO LA CAPACIDAD DE LOS NANOCOMPOSITES PARA PROLONGAR LA DURABILIDAD DE LA PROTECCION A LA INFECCION VIRICA.PARA EL NUEVO PROYECTO SE PLANTEAN LOS OBJETIVOS SIGUIENTES: 1) CARACTERIZACION DE NANOPARTICULAS DE QUITOSAN Y DEXTRANOS COMO CARRIERS DE DSRNA (NANOCOMPOSITES), 2) SINTESIS Y CARACTERIZACION DE ESTUDIOS DE NANOPARTICULAS FLUORESCENTES (CARBON DOTS) COMO CARRIERS Y MARCADORES DE DSRNA, 3) EVALUACION DE LOS NANOCOMPOSITES NP:DSRNA PARA CONTROL DE VIRUS DE PLANTAS Y COMPARACION CON LAS NANOPARTICULAS ANTERIORES EN CUANTO A ESTABILIDAD, CAPACIDAD DE PENETRACION EN EL TEJIDO VEGETAL Y CAPACIDAD DE LIBERACION DE DSRNA EN LA SUPERFICIE DE LA PLANTA, 4) ESTUDIOS DE FITOTOXICIDAD DE LAS NANOPARTICULAS Y ENSAYOS DE TOXICIDAD EN CELULAS HUMANAS, TANTO DE LAS NANOPARTICULAS DEL PROYECTO ANTERIOR (LDH, HAP) COMO DE LAS QUE SE PROPONEN PARA EL NUEVO PROYECTO (QUITOSAN, DEXTRANOS, CDS), 5) ANALISIS GENETICO Y MOLECULAR DE GENES CANDIDATO DE RESISTENCIA A TOLCNDV EN CALABACIN Y MELON, 6) CRIBADO DE LOS GENES CANDIDATOS DE PARTIDA SOBRE MATERIAL R Y S DE CALABAZA O MELON, 7) VALIDACION DE LA FUNCION GENICA EN LAS PLATAFORMAS DE CUCURBITA TILLING (C. PEPO) Y ECOTILLING; 8) BUSQUEDA DE RESISTENCIAS A CGMMV EN BANCO DE GERMOPLASMA DE SANDIA CON AISLADOS CGMMV-SP Y CG-SPCU16 (CEPAS EUROPEA Y ASIATICA, RESPECTIVAMENTE); SE ANOTARA LA EVOLUCION DE SINTOMAS EN TODAS ESTAS PLANTAS Y SE TOMARAN MUESTRAS DE HOJA PARA SU POSTERIOR ANALISIS RT-QPCR DEL VIRUS; SE IDENTIFICARAN AQUELLAS PLANTAS QUE PRESENTEN EL MENOR NUMERO POSIBLE DE SINTOMAS Y ADEMAS QUE ACUMULEN LA MENOR CARGA DE INOCULO. 9) CARACTERIZACION DE LA HERENCIA DE LA RESISTENCIA A CGMMV EN MELON. SE HARAN CRUCES DE GENOTIPOS RESISTENTES CON GENOTIPOS SUSCEPTIBLES PARA LA OBTENCION DE HIBRIDOS, Y SE ESTUDIARAN LAS POBLACIONES SEGREGANTES PARA MAPAR LA RESISTENCIA. LAS POBLACIONES CONSTRUIDAS SE FENOTIPARAN POR SU RESISTENCIA AL VIRUS. EN PARALELO SE GENOTIPARAN EMPLEANDO LA PLATAFORMA DE GENOTIPADO CON SNPS. IRUS\NANOPARTICULAS\TOLCNDV\CGMMV\RESISTENCIA\MEJORA GENETICA\RNAI