Descripción del proyecto
LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS DE PLANTAS PROVOCADAS POR VIRUS Y VIROIDES SON UNO DE LOS FACTORES QUE LIMITAN EL DESARROLLO DE LAS PRACTICAS AGRICOLAS Y AL MISMO TIEMPO PUEDEN SUPONER UNA AMENAZA PARA LOS ECOSISTEMAS NATURALES. LOS POTYVIRUS (GENERO POTYVIRUS, FAMILIA POTYVIRIDAE) SON UNO DE LOS GRUPOS DE VIRUS DE PLANTAS CON MAYOR DIVERSIDAD. SU GENOMA ESTA CONSTITUIDO POR UNA MOLECULA DE RNA DE POLARIDAD (+) DE ALREDEDOR DE 10000 NT QUE CODIFICA, PRINCIPALMENTE, UN LARGA POLIPROTEINA QUE ES PROCESADA EN UNOS ONCE PRODUCTOS GENICOS MADUROS POR TRES PROTEASAS VIRALES. LOS VIROIDES SON UN GRUPO MUY PARTICULAR DE PATOGENOS DE PLANTAS CONSTITUIDOS EXCLUSIVAMENTE POR UN PEQUEÑO RNA CIRCULAR (246-401 NT) QUE NO CODIFICA NINGUNA PROTEINA. SE REPLICAN MEDIANTE UN MECANISMO DE CIRCULO RODANTE DE RNA EN EL NUCLEO (FAMILIA POSPIVIROIDAE) O EL CLOROPLASTO (FAMILIA AVSUNVIROIDAE) DE LAS CELULAS QUE INFECTAN. A PESAR DE SUS PEQUEÑOS GENOMAS DE RNA, POTYVIRUS Y VIROIDES SON CAPACES DE COMPLETAR UN COMPLEJO CICLO INFECTIVO EN EL INTERIOR DE LAS CELULAS EN LAS QUE SE PROPAGAN, EXTRAORDINARIAMENTE INTRINCADO CON LAS RUTAS MOLECULARES Y CELULARES DEL HUESPED. LA FINALIDAD DE ESTE PROYECTO ES CARACTERIZAR ALGUNAS DE LAS INTERACCIONES QUE OCURREN ENTRE POTYVIRUS Y VIROIDES CON SUS PLANTAS HUESPED QUE PERMITEN EL ESTABLECIMIENTO DEL PROCESO INFECTIVO, Y DESARROLLAR HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS PARA LA PROTECCION, MEJORA E INNOVACION EN LOS CULTIVOS BASADAS EN EL CONOCIMIENTO DE ESTAS INTERACCIONES MOLECULARES. LOS OBJETIVOS CONCRETOS DEL PROYECTO SON: (1) IDENTIFICAR FACTORES DEL HUESPED IMPLICADOS DIRECTA O INDIRECTAMENTE EN EL CICLO INFECTIVO DE POTYVIRUS Y VIROIDES, (2) CARACTERIZAR FUNCIONALMENTE ESTAS INTERACCIONES, (3) DESARROLLAR ESTRATEGIAS DE PROTECCION DE CULTIVOS MEDIANTE ALELOS DE FACTORES DEL HUESPED INCOMPATIBLES CON EL CICLO INFECTIVO DEL PATOGENO Y MEDIANTE EXPRESION DE MICRORNAS ARTIFICIALES, Y (4) DESARROLLAR UN VECTOR DE EXPRESION EN PLANTAS DE UTILIDAD EN INGENIERIA METABOLICA. PARA ELLO SE PURIFICARAN COMPLEJOS ENTRE LOS FACTORES DEL HUESPED Y FACTORES DEL PATOGENO CONVENIENTEMENTE ETIQUETADOS, SIEMPRE EN EL CONTEXTO DE UN PROCESO DE INFECCION. A PARTIR DE ESTOS COMPLEJOS SE IDENTIFICARAN LOS FACTORES DEL HUESPED QUE INTERACCIONAN CON LOS DEL PATOGENO. SE REALIZARAN ENSAYOS IN VIVO EN CONDICIONES FISIOLOGICAS PARA CARACTERIZAR FUNCIONALMENTE LAS INTERACCIONES. SE IDENTIFICARAN ALELOS DE FACTORES DEL HUESPED CRUCIALES PARA EL PATOGENO QUE RESULTEN INCOMPATIBLES CON EL CICLO INFECTIVO Y QUE PUEDAN CONLLEVAR RESISTENCIA A LA INFECCION POR PARTE DE LA PLANTA. TAMBIEN SE EXPRESARAN COMBINACIONES DE MICRORNAS ARTIFICIALES CONTRA DOS PATOGENOS IMPORTANTES EN HORTICULTURA: EL VIRUS DEL BRONCEADO DEL TOMATE Y EL VIROIDE DEL ENANISMO CLOROTICO DEL TOMATE. FINALMENTE, SE CONTINUARA EL DESARROLLO DE UN VECTOR VIRAL DESARMADO BASADO EN EL POTYVIRUS DEL GRABADO DEL TABACO QUE PERMITE COEXPRESAR SIMULTANEAMENTE CANTIDADES EQUIMOLARES DE VARIOS PRODUCTOS GENICOS Y SE EVALUARA SU UTILIDAD EN INGENIERIA METABOLICA DE PLANTAS EXPRESANDO ENZIMAS DE LA RUTA DE BIOSINTESIS DEL ALCALOIDE PACLITAXEL. EN DEFINITIVA, Y DESDE UNA PERSPECTIVA MAS GENERAL, EL PROYECTO QUE SE PROPONE DE PERMITIR AVANZAR EN EL CONOCIMIENTO DE ALGUNOS DE LOS PAPELES QUE EL RNA JUEGA EN LOS SISTEMAS BIOLOGICOS. NTERACCION VIRUS-HUESPED\INGENIERIA METABOLICA\VECTOR EXPRESION\RESISTENCIA A VIRUS\INTERACCION RNA-PROTEINA\INTERACCION PROTEINA-PROTEINA\PROCESAMIENTO RNA\REPLICACION RNA\VIROIDE\POTYVIRUS