Descripción del proyecto
OBJETIVOS: 1) DETERMINACION DE LAS SUBPOBLACIONES CELULARES IMPLICADAS EN LA RESPUESTA INMUNE DE LA ENFERMEDAD DE CROHN (EC) PRODUCTORAS DE IL-10 EN LA MUCOSA INTESTINAL, 2) DETERMINACION DEL VALOR PREDICTIVO DE RESPUESTA TERAPEUTICA DE LOS VALORES DE IL-10 EN SUERO Y EN SOBRENADANTE DE CULTIVO DE BIOPSIA ENDOSCOPICA Y DE LA EXPRESION DE IL-10 EN EL INTESTINO, 3) EFECTO DE LA IL-10 SOBRE LA TASA DE APOPTOSIS DE CELULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFERICA EN CULTIVO ESTIMULADO IN VITRO CON CORTICOESTEROIDES Y SU RELACION CON LA RESPUESTA TERAPEUTICA, METODOS: OBJETIVOS 1 Y 2: INCLUSION DE PACIENTES CON EC ANTES DEL INICIO DEL TRATAMIENTO CON CORTICOIDES, 10 DIAS DESPUES Y TRAS TRATAMIENTO CON TERAPIA DE RESCATE (INMUNOSUPRESORES Y/O BIOLOGICOS) EN LOS PACIENTES REFRACTARIOS, EVALUACION DE LA RESPUESTA CON INDICES ESTABLECIDOS, CONTROLES: COLITIS ULCEROSA, COLITIS MICROSCOPICA Y CONTROLES SIN INFLAMACION, SE TOMARAN 9 BIOPSIAS CON PINZA DE ZONA INFLAMADA DE PACIENTES CON EC, CU Y COLITIS MICROSCOPICA, PARA LA REALIZACION DEL ESTUDIO HISTOLOGICO (GRAVEDAD) E INMUNOHISTOQUIMICO (EXPRESION PROTEINA IL-10), PARA RT-PCR (EXPRESION MRNA IL10), PARA INMUNOFLUORESCENCIA (CO-LOCALIZACION IL10 CON CD3, CD20, CD11B, CD68, CD4, CD8, CD25, FOXP3), PARA CULTIVO DE BIOPSIA (ELISA IL-10 SOBRENADANTE CULTIVO DE BIOPSIA), SE EXTRAERAN 10 ML DE SANGRE PARA LA DETERMINACION DE IL-10 POR ELISA EN SUERO, OBJETIVO 3: EVALUACION EN EL MOMENTO BASAL: 20 ML DE SANGRE TUBOS EDTA Y EXTRACCION DE CELULAS MONONUCLEARES, SE MEDIRA LA TASA DE APOPTOSIS EN CADA CONDICION DE CULTIVO (48H CON Y SIN 1 μM DE DEXAMETASONA; CON Y SIN 1μG/ML DE IL-10 HUMANA RECOMBINANTE (HR)) MEDIANTE MARCAJE ANEXINA/7AAD CON MARCADORES DE SUPERFICIE: CD3, CD8 CD4, CD4, CD25, CD11B, EN TODOS LOS CASOS SE VALORARAN LOS RESULTADOS EN FUNCION DE LA RESPUESTA TERAPEUTICA,