Descripción del proyecto
LA PARATUBERCULOSIS BOVINA (PTB) ES UNA ENTERITIS GRANULOMATOSA CRONICA, CAUSADA POR MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS (MAP), RESPONSABLE DE IMPORTANTES PERDIDAS ECONOMICAS EN LOS REBAÑOS LECHEROS DE TODO EL MUNDO DEBIDO A LA DISMINUCION DE LA PRODUCCION DE LECHE, EL AUMENTO DE LOS COSTOS DE GESTION Y EL SACRIFICIO PREMATURO O LA MUERTE POR ENFERMEDAD CLINICA. VARIOS PROGRAMAS DE CONTROL DE LA PTB, BASADOS EN LA VACUNACION Y EL SANEAMIENTO HAN SIDO DESARROLLADOS, SIN EMBARGO, LA PTB SIGUE SIENDO UN DESAFIO A NIVEL MUNDIAL. EN ESTE CONTEXTO, UNA ESTRATEGIA DE GESTION ALTERNATIVA PARA CONTROLAR LA PTB SERIA LA IDENTIFICACION Y SELECCION DE GANADO CAPAZ DE TOLERAR LA ENFERMEDAD SIN QUE SU SALUD Y PRODUCCION DE LECHE SE VEAN COMPROMETIDAS. EN EL PRESENTE PROYECTO, UTILIZAREMOS ESTRATEGIAS INNOVADORAS (ANALISIS PROTEOMICO DE MUESTRAS DE SUERO Y TEJIDO INTESTINAL) QUE TIENEN EL POTENCIAL DE IDENTIFICAR BIOMARCADORES ASOCIADOS CON DIFERENTES FENOTIPOS DE TOLERANCIA A LA PTB. SE ESTUDIARAN DOS GRUPOS DE TOLERANCIA: (I) ANIMALES CON LESIONES MULTIFOCALES, HIPOTETIZAMOS QUE LOS GRANULOMAS MULTIFOCALES PODRIAN PREVENIR LA DISEMINACION DE MAP Y EL DAÑO TISULAR Y (II) ANIMALES CON CARGA DE MAP SIN LESIONES EN SUS TEJIDOS INTESTINALES. LOS BIOMARCADORES IDENTIFICADOS SERAN VALIDADOS MIDIENDO SUS NIVELES DE EXPRESION MEDIANTE ELISAS ESPECIFICOS Y ANALISIS INMUNOHISTOLOGICO DE MUESTRAS DE REFERENCIA. EL BIOMARCADOR CON EL MEJOR RENDIMIENTO SERA SELECCIONADO PARA EL DESARROLLO DE UNA NUEVA PLATAFORMA DE DETECCION POINT OF CARE, UN BIOSENSOR QUIMICO OPTICO, RAPIDO, PRECISO Y RENTABLE, BASADO EN NANOPARTICULAS DE ORO FUNCIONALIZADAS CON ANTICUERPOS ESPECIFICOS. ESTUDIOS GENETICOS DEL HOSPEDADOR MOSTRARON UNA CORRELACION ENTRE NIVELES ALTOS DE EXPRESION DE CITOQUERATINA Y EGR4 (DEL INGLES, EARLY GROWTH RESPONSE FACTOR 4) Y ANIMALES INFECTADOS CON LESIONES MULTIFOCALES. EL POTENCIAL DE ESTAS PROTEINAS COMO BIOMARCADORES TISULARES DE ANIMALES TOLERANTES A LA PTB CON LESIONES MULTIFOCALES SE EVALUARA MEDIANTE INMUNOHISTOQUIMICA E INMUNOFLUORESCENCIA, USANDO ANTICUERPOS ESPECIFICOS FRENTE LA CITOQUERATINA Y EGR4, EN SECCIONES DE TEJIDOS INTESTINALES DE ANIMALES CON DIFERENTES FORMAS PATOLOGICAS DE INFECCION.LA TOLERANCIA SE DEFINE COMO LOS MECANISMOS QUE REDUCEN LA SUSCEPTIBILIDAD DEL HOSPEDADOR AL DAÑO TISULAR U OTROS DAÑOS DE APTITUD FISICA CAUSADOS POR PATOGENOS O POR LA RESPUESTA INMUNE. CON EL FIN DE INVESTIGAR LOS MECANISMOS UTILIZADOS POR LOS ANIMALES TOLERANTES A LA PTB PARA CONTROLAR LA ENFERMEDAD, SE DESARROLLARA UN MODELO UNICO Y NOVEDOSO DE LA MUCOSA INTESTINAL BOVINA UTILIZANDO TECNOLOGIAS DE CULTIVO CELULAR BASADAS EN ANDAMIOS 3D. EL MODELO INTESTINAL PROPUESTO TRASCENDERA LAS LIMITACIONES DE LOS MODELOS IN VITRO ACTUALES USADOS EN LOS ESTUDIOS DE LA FISIOPATOLOGIA INTESTINAL AL RECREAR LA ARQUITECTURA MULTICELULAR (CELULAS EPITELIALES, ESTROMALES E INMUNITARIAS) Y MULTICAPA DEL INTESTINO BOVINO Y PERMITIR EL CULTIVO A LARGO PLAZO, OFRECIENDO UNA NUEVA OPORTUNIDAD PARA ESTUDIAR LA INMUNOPATOGENESIS DE LA INFECCION EN VACAS TOLERANTES A LA PTB. ESTE ENFOQUE INNOVADOR ABRIRA NUEVAS OPORTUNIDADES PARA LA INVESTIGACION DE OTRAS ENFERMEDADES INTESTINALES DEL GANADO Y PROPORCIONARA UNA ALTERNATIVA SOLIDA A LA EXPERIMENTACION ANIMAL.EL PROYECTO PERMITIRA DESARROLLAR HERRAMIENTAS INNOVADORAS PARA LA IDENTIFICACION DE ANIMALES TOLERANTES A LA PTB CON EL OBJETO DE MEJORAR LA SALUD DE LOS REBAÑOS Y REDUCIR LAS PERDIDAS ECONOMICAS. ARATUBERCULOSIS\MODELO DE CULTIVO IN VITRO DE MUCOSA INT\BIOSENSOR\BIOMARCADORES\PROTEOMICA\TOLERANCIA