Descripción del proyecto
LAS CIANOBACTERIAS REALIZAN FOTOSINTESIS OXIGENICA Y COLONIZAN LA MAYORIA DE ECOSISTEMAS ILUMINADOS, POR LO QUE TIENEN UN GRAN IMPACTO EN LOS CICLOS GLOBALES DE CARBONO Y NITROGENO, SIN EMBARGO, A PESAR DE SU EXITO ECOLOGICO E IMPORTANCIA BIOTECNOLOGICA, LOS MECANISMOS RESPONSABLES DE ESTA VERSATILIDAD Y CAPACIDAD DE ADAPTACION AMBIENTAL PERMANECEN DESCONOCIDOS, EN ESTE CONTEXTO, SYNECHOCOCCUS ELONGATUS SP, PCC 7942, DE RELATIVAMENTE FACIL MANIPULACION GENETICA, ES UN EXCELENTE SISTEMA MODELO PARA EL ESTUDIO DE LAS INTERACCIONES REGULADORAS QUE PERMITEN A LAS CIANOBACTERIAS INTEGRAR Y RESPONDER ADECUADAMENTE A MUY DISTINTAS SEÑALES AMBIENTALES,EL PROPOSITO PRINCIPAL DE ESTE PROYECTO ES CARACTERIZAR LA PROTEINA MULTIFUNCIONAL PIPX, UN FACTOR UNICO DE CIANOBACTERIAS QUE CONECTA REGULADORES TRANSCRIPCIONALES, PROTEINAS SEÑALIZADORAS Y ENZIMAS METABOLICAS EN UNA RED DE INTERACCIONES COMPLEJA Y DINAMICA, MEDIANTE ENSAYOS IN VIVO DE CO-PURIFICACION CON LA PROTEINA FLAG-PIPX PRETENDEMOS IDENTIFICAR NUEVOS COMPONENTES DE LAS VIAS DE SEÑALIZACION EN LAS QUE PARTICIPA PIPX, ADEMAS DE VALIDAR INTERACCIONES Y RESULTADOS PREVIOS PROCEDENTES DE ESCRUTINIOS DOBLE HIBRIDO CON PIPX (PROTEINAS XIP), TRIPLE HIBRIDO (PXR, IDENTIFICADO USANDO A LA VEZ PII Y PIPX COMO CEBO) O DE ANALISIS IN SILICO (ORF2060), PARA CARACTERIZAR LAS INTERACCIONES (ENTRE PROTEINAS, Y CON POSIBLES EFECTORES) EN MAYOR DETALLE, UTILIZAREMOS ENSAYOS IN VITRO Y/O DOBLE(TRIPLE) HIBRIDO CON PROTEINAS COMPLETAS, DERIVADOS MUTANTES Y/O DOMINIOS CONCRETOS, RECURRIREMOS AL USO DE MICROSCOPIA CONFOCAL PARA DETERMINAR SI ALGUNA DE LAS PROTEINAS ESTUDIADAS CO-LOCALIZA EN LOS FOCOS POLARES DE PIPX, CUYA LOCALIZACION DINAMICA RESPONDE A CICLOS DE LUZ OSCURIDAD, PARA DESCRIBIR LOS GENES REGULADOS POR PIPX INDEPENDIENTEMENTE DE NTCA, LLEVAREMOS A CABO ANALISIS TRANSCRIPTOMICOS CON UN PANEL DE ESTIRPES, EN DISTINTAS CONDICIONES DE CULTIVO, QUE INCLUYE DIVERSOS TIPOS DE DERIVADOS DEL GEN PIPX, Y DE OTROS GENES RELACIONADOS, LOS DATOS GENERADOS SERAN UTILIZADOS PARA CLASIFICAR GENES DIFERENCIALMENTE REGULADOS EN GRUPOS CON PATRONES DE REGULACION COMUNES, PARA DESPUES ABORDAR LOS DISTINTOS MECANISMOS DE REGULACION IMPLICADOS, INVESTIGAREMOS LOS SITIOS DE UNION DE PXR MEDIANTE CHIP-SEQ, INFORMACION QUE INTEGRAREMOS CON LA PROCEDENTE DEL ANALISIS DE LA TRANSCRIPTOMICA, INVESTIGAREMOS LA POSIBLE METILACION DE ARGININAS EN LA ALFA-HELICE1 DE PIPX Y EN SU CASO, ESTUDIAREMOS EL SIGNIFICADO FUNCIONAL Y DETERMINANTES GENETICOS DE LAS MODIFICACIONES, TANTO LAS METILASA(S) CANDIDATA(S) COMO OTRAS PROTEINAS HALLADAS EN LAS BUSQUEDAS DE INTERACCIONES PROTEINA-PROTEINA Y/O IN SILICO, SERAN OBJETO DE ANALISIS, SE PRETENDE LA INACTIVACION DE LOS CORRESPONDIENTES GENES Y ANALISIS FENOTIPICOS PERTINENTES, ESTUDIAREMOS TAMBIEN DETALLES MOLECULARES EN LA SEÑALIZACION HACIA EL PROCESO DE LA CLOROSIS, UNA ADAPTACION DRAMATICA A DISTINTOS TIPOS DE ESTRES AMBIENTALES, EN EL QUE NBLR Y NTCA-PIPX, ENTRE OTROS REGULADORES, CONVERGEN PARA EL PROMOTOR DEL GEN NBLA, ESENCIAL PARA LA DEGRADACION DE FICOBILISOMAS, ESTAMOS INTERESADOS EN DESCIFRAR ALGUNAS DE LAS COMPLEJIDADES REGULADORAS, COMO EL MECANISMO DE ACTIVACION Y FUNCION DE NBLR Y EN LAS INTERACCIONES REGULADORAS DE LAS DISTINTAS VIAS QUE CONVERGEN EN EL PROMOTOR NBLA, MUCHAS DE LAS ESTRATEGIAS METODOLOGICAS PROPUESTAS EN RELACION A PIPX, SERAN TAMBIEN UTILIZADAS CON NBLR, PIPX\PII\NBLR\TRANSCRIPTOMA\CIANOBACTERIAS\REGULACIÓN POR NITRÓGENO\LOCALIZACIÓN DINÁMICA