Descripción del proyecto
LOS MECANISMOS MOLECULARES IMPLICADOS EN LA FORMACION DE COMUNIDADES MULTICELULARES BACTERIANAS (BIOFILMS) SOBRE SUPERFICIES TANTO ABIOTICAS COMO BIOTICAS ESTAN SIENDO OBJETO DE INTENSO ESTUDIO DEBIDO A SU IMPORTANCIA MEDICA, MEDIOAMBIENTAL Y EN ACTIVIDADES BIOTECNOLOGICAS, DESDE UN PUNTO DE VISTA BASICO, EL DESARROLLO DE BIOFILMS ES UN PROCESO SOMETIDO A UNA COMPLEJA REGULACION QUE ESTA EMPEZANDO A DESVELARSE, EN MUCHAS BACTERIAS, EL SEGUNDO MENSAJERO INTRACELULAR DIGUANILATO CICLICO (C-DI-GMP) JUEGA UN PAPEL CLAVE EN LA TRANSICION ENTRE ESTILOS DE VIDA PLANCTONICO, QUE IMPLIQUEN MOTILIDAD, Y SESIL, LAS ACTIVIDADES ENZIMATICAS DIGUANILATO CICLASA (DGC) Y FOSFODIESTERASA SON LAS RESPONSABLES DE LA SINTESIS Y DEGRADACION DE ESTA MOLECULA SEÑALIZADORA, RESPECTIVAMENTE, EN ESTA PROPUESTA SE PRETENDE AMPLIAR EL CONOCIMIENTO DE LA RED DE REGULACION CUYO NODO CENTRAL ES EL REGULADOR DE RESPUESTA CON ACTIVIDAD DGC RUP4959 DE PSEUDOMONAS PUTIDA KT2440, UNA BACTERIA DE INTERES POR SUS PROPIEDADES BENEFICIOSAS EN LA INTERACCION CON PLANTAS, EL GEN RUP4959 SE IDENTIFICO EN UN ANALISIS TRANSCRIPTOMICO GLOBAL COMO DE EXPRESION PREFERENTE EN POBLACIONES DE P, PUTIDA EN LA RIZOSFERA DE MAIZ, LA SOBREEXPRESION DE ESTE GEN EN CONDICIONES DE LABORATORIO DA LUGAR A UN FENOTIPO PLEIOTROPICO QUE INCLUYE UN INCREMENTO EN LA FORMACION DE BIOFILM, EL CUAL ADEMAS NO SE DISGREGA EN CONDICIONES DE ESCASEZ DE NUTRIENTES, COSA QUE SI OCURRE EN POBLACIONES CON NIVELES FISIOLOGICOS DE C-DI-GMP EN DICHAS CONDICIONES, EN EL PROYECTO INMEDIATAMENTE ANTERIOR, SE IDENTIFICARON GENES QUE PARTICIPAN EN LA RED DE SEÑALIZACION POR C-DI-GMP MEDIADA POR RUP4949, Y QUE SON OBJETO DE ANALISIS DETALLADO EN ESTA PROPUESTA, PARA ELLO, LOS OBJETIVOS DEL PROYECTO SON: I) CARACTERIZAR FUNCIONALMENTE LOS DOMINIOS ESTRUCTURALES DE LA MULTISENSOR HISTIDINA-QUINASA DE MEMBRANA CFCA, QUE HEMOS IDENTIFICADO COMO ESENCIAL PARA QUE RUP4959 MUESTRE ACTIVIDAD DGC, Y ASI PODER CONFIRMAR QUE, AUNQUE NO ESTEN AGRUPADOS GENETICAMENTE, CFCA Y RUP4959 CONSTITUYEN EFECTIVAMENTE UN SISTEMA DE TRANSDUCCION DE SEÑAL DE DOS COMPONENTES CON UN PAPEL EN FORMACION DE BIOFILM Y EN MOTILIDAD, ESTO ULTIMO JUNTO A LOS GENES ADYACENTES A CFCA, UN SET CHEB/CHER CON LOS QUE FORMA UN CLUSTER; II) AMPLIAR EL ANALISIS DE LA CASCADA DE REGULACION POR ENCIMA DE RUP4959, QUE ENGLOBA EL SISTEMA REGULADOR DE DOS COMPONENTES GACS/GACA, PROTEINAS REPRESORAS DE LA FAMILIA CSRA/RSMA, Y PEQUEÑOS RNA REGULADORES QUE PRETENDEMOS IDENTIFICAR; III) ESTUDIAR LA FUNCION DE LOS REGULADORES TRANSCRIPCIONALES FLEQ Y ALGU EN LA TRANSDUCCION DE LA SEÑAL POR C-DI-GMP Y EN LA EXPRESION DE ADHESINAS Y EXOPOLISACARIDOS (EPSS) QUE CONFORMAN LA MATRIZ EXTRACELULAR DEL BIOFILM; Y IV) ESTABLECER LA POSIBLE CONEXION ENTRE DETERMINADAS RUTAS METABOLICAS, EN PARTICULAR LAS RELACIONADAS CON LA SINTESIS DE ARGININA Y UTILIZACION DE AZUCARES, Y LA SEÑALIZACION POR C-DI-GMP, ASI COMO EL POSIBLE PAPEL DE AZUCARES NO METABOLIZABLES COMO SEÑAL MEDIADA POR C-DI-GMP, LOS RESULTADOS QUE SE OBTENGAN DE ESTE PROYECTO PERMITIRAN ESTABLECER LAS DISTINTAS CONEXIONES, GENETICAMENTE Y/O POR INTERACCION DIRECTA, ENTRE ELEMENTOS REGULADORES ASOCIADOS AL C-DI-GMP, A NIVEL TRANSCRIPCIONAL, POSTRANSCRIPCIONAL Y POSTRADUCCIONAL, Y COMPLETAR EL MODELO ACTUAL DE CONTROL DE LOS ELEMENTOS ESTRUCTURALES CLAVE (EPS Y ADHESINAS) PARA EL ESTABLECIMIENTO DE BIOFILMS SOBRE SUPERFICIES ABIOTICAS Y VEGETALES, PSEUDOMONAS\ BIOFILM\ C-DI-GMP\ EXPRESIÓN GÉNICA\ REGULACIÓN\ EXOPOLISACÁRIDOS\ ADHESINAS