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CTQ2008-01725

Financiado

MARCAJE ELEMENTAL (ISOTOPICO) COMO NUEVA ESTRATEGIA EN LA CUANTIFICACION DE PROT...

LA CUANTIFICACION ES UNO DE LOS RETOS QUE PRESENTA EL ESTUDIO DE PROTEINAS, PUESTO QUE EL CONOCIMIENTO DE LA CONCENTRACION (DE FORMA PRECISA Y EXACTA) DE UNA PROTEINA DADA PUEDE, EN ALGUNOS CASOS, RELACIONARSE CON CIERTOS PROCESOS... ver más

01/01/2008

UNIOVI

76K€

Presupuesto del proyecto: 76K€

Líder del proyecto

Universidad de Oviedo No se ha especificado una descripción o un objeto social para esta compañía.

Total investigadores 787

Financiación concedida El organismo AGENCIA ESTATAL DE INVESTIGACIÓN notifico la concesión del proyecto el día 2008-01-01

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Participantes

UNIOVI

Lider

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Líder del proyecto

Universidad de Oviedo

Total investigadores 787

Presupuesto del proyecto 76K€

Descripción del proyecto LA CUANTIFICACION ES UNO DE LOS RETOS QUE PRESENTA EL ESTUDIO DE PROTEINAS, PUESTO QUE EL CONOCIMIENTO DE LA CONCENTRACION (DE FORMA PRECISA Y EXACTA) DE UNA PROTEINA DADA PUEDE, EN ALGUNOS CASOS, RELACIONARSE CON CIERTOS PROCESOS CELULARES O INCLUSO CON CIERTO TIPO DE PATOLOGIAS, SIN EMBARGO, AUNQUE EL DESAROLLO DE METODOS PARA LA DETECCION Y DETERMINACION ESTRUCTURAL DE PROTEINAS HA EXPERIMENTADO UN INCREMENTO NOTABLEMENTE EN LOS ULTIMOS AÑOS Y MEJORADO EN TERMINOS DE ESPECIFICIDAD Y APLICABILIDAD, TODAVIA EXISTEN LIMITACIONES RESPECTO A LOS METODOS DE CUANTIFICACION, ESPECIALMENTE DESDE UN PUNTO DE VISTA ANALITICO,ESTE PROYECTO TIENE COMO OBJETIVO PRINCIPAL EL DESARROLLO DE METODOLOGIAS ANALITICAS QUE PERMITAN ABORDAR LAS LIMITACIONES ACTUALES DE LOS METODOS DE CUANTIFICACION DE PROTEINAS BASANDOSE EN TECNICAS DE MARCAJE ELEMENTAL Y UTILIZACION DE ESPECTROMETRIA DE MASAS ELEMENTAL, ESTOS ESTUDIOS, INICIALMENTE BASICOS SERAN SEGUIDAMENTE APLICADOS A LA CUANTIFICACION DE PROTEINAS EN MUESTRAS DE INTERES BIOLOGICO Y A MATERIALES DE REFERENCIA QUE PERMITAN CONTROLAR LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS,POR TANTO, LA METODOLOGIA ANALITICA QUE AQUI SE PROPONE ABORDA LOS ASPECTOS BASICOS SIGUIENTES:1, EL ESTUDIO DE LOS DISTINTOS PROCEDIMIENTOS DE MARCAJE (PRODUCTOS FINALES OBTENIDOS, ESTEQUIOMETRIAS, ETC,) QUE SE REALIZARA A TRAVES DE TECNICAS ANALITICAS COMO ELECTROSPRAY-MASAS (ESI-MS) Y MALDI-MS,2, EL ESTUDIO EN PROFUNDIDAD DE LOS ASPECTOS CUANTITATIVOS (RENDIMIENTO DE LA DERIVATIZACION, ESTABILIDAD DE LAS ESPECIAS MARCADAS, ETC,) QUE SERA INVESTIGADO USANDO EL PLASMA DE ACOPLAMIENTO INDUCTIVO-ESPECTROMETRIA DE MASAS (ICP-MS), EL CONCEPTO GENERAL, QUE DEBE SER PROBADO EN ESTA PARTE DEL PROYECTO, ES SI LA CUANTIFICACION DE PROTEINAS BASADA EN EL EMPLEO DEL ICP-MS DESPUES DEL MARCAJE ELEMENTAL PUEDE PROPORCIONAR UNA ALTERNATIVA A LOS METODOS EXISTENTES DE PROTEOMICA CUANTITATIVA, LAS DISTINTAS ETAPAS DEL PROYECTO PUEDEN DIVIDIRSE EN TRES PARTES: I) LA EVALUACION DE LA REACCION DE BIO-CONJUGACION, VARIOS COMPUESTOS DE MARCAJE SE EVALUARAN, P,E, ACIDO P-HIDROXIMERCURIBENZOICO (PHMB), TODOS LOS COMPUESTOS EMPLEADOS TENDRAN EN COMUN LA CAPACIDAD DE FORMAR ENLACES COVALENTES ENTRE EL METAL (MARCADOR ELEMENTAL) Y UN GRUPO REACTIVO DE LA PROTEINA, P,E, GRUPO SH DE LA CISTEINA, Y DICHO ENLACE SERA CARACTERISTICO DEL BIOCONJUGADO, LOS ESTUDIOS INICIALES ABORDAN LOS ASPECTOS FUNDAMENTALES DE LAS REACCIONES DE DERIVATIZACION E,G, RENDIMIENTO, ESTEQUIOMETRIA DEL BIOCONJUGADO, Y FINALMENTE, LA ELUCIDACION DE LOS SITIOS DE UNION MARCADOR-PROTEINA, II) EN LA SEGUNDA PARTE SE EVALUARA LA SINTESIS DE LOS COMPUESTOS QUE MEJOR RESULTEN PARA EL MARCAJE PERO CON SUS ABUNDANCIAS ISOTOPICAS ALTERADAS, ESTE TIPO DE COMPUESTOS (NORMALMENTE EMPLEANDO 2H, 13C, 15N, 18O) SE HAN UTILIZADO PARA EL MARCAJE EN PROTEOMICA, EN ESTE CASO, EL EMPLEO DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS ELEMENTAL PERMITE EMPLEAR ELEMENTOS COMO HG CON SUS ABUNDANCIAS ISOTOPICAS ALTERADAS COMO MARCADOR PARA SER EMPLEADO POSTERIORMENTE EN ESTUDIOS DE DILUCION ISOTOPICA, EN ESTE CASO EL PHMB ENRIQUECIDO EN 201HG, QUE NO SE ENCUENTRA DISPONIBLE COMERCIALMENTE, POR TANTO, NECESITARA SER SINTETIZADO, CARACTERIZADO Y APLICADO AL MARCAJE DE PROTEINAS, LAS PROTEINAS MARCADAS SERVIRAN A CONTINUACION COMO ESTANDARES DE CUANTIFICACION A TRAVES DEL MARCAJE ELEMENTAL, III) COMO ULTIMA PARTE DEL PROYECTO, SE APLICARA LA METODOLOGIA A LA DETERMINACION DE PEPTIDOS Y PROTEINAS EN MUESTRAS REALES, marcaje elemental\análisis por dilución isotópica\cuantificación absoluta de proteínas\espectrometría de masas elemental\técnicas hibridas

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