Descripción del proyecto
LOS CONOCIMIENTOS ACTUALES SOBRE LA REGULACION, LA ORGANIZACION Y LA COMPARTIMENTALIZACION DE LA VIA DEL MEVALONATO (MVA) EN PLANTAS SON TODAVIA BASTANTE LIMITADOS, LO CUAL A MENUDO COMPROMETE EL EXITO DE LAS ESTRATEGIAS DE INGENIERIA METABOLICA ORIENTADAS A PRODUCIR TERPENOIDES DE INTERES BIOTECNOLOGICO, LA FARNESILDIFOSFATO (FPP) SINTASA (FPS) CATALIZA LA SINTESIS DE FPP A PARTIR DE ISOPENTENILDIFOSFATO Y SU ISOMERO DIMETILALILDIFOSFATO, ARABIDOPSIS THALIANA TIENE 3 ISOENZIMAS FPS QUE PROPORCIONAN FPP PARA LA SINTESIS DE TERPENOIDES EN EL CITOSOL-RE (FPS1S Y FPS2) Y EN LAS MITOCONDRIAS (FPS1L), EN ESTE PROYECTO PRETENDEMOS ESTABLECER LA FUNCION DE LAS DISTINTAS ISOENZIMAS FPS EN LA VIA DEL MVA Y, PARA ELLO, SE DETERMINARAN SUS PROPIEDADES CINETICAS, SE ESTABLECERA SU LOCALIZACION SUBCELULAR Y SE CARACTERIZARAN MUTANTES DE A, THALIANA CON PERDIDA TOTAL O PARCIAL DE FUNCION DE CADA UNO DE LOS DOS GENES ATFPS, POR OTRA PARTE, ESTA PREVISTO ENSAYAR ESTRATEGIAS DE INGENIERIA METABOLICA ORIENTADAS A PRODUCIR EN EL CITOSOL Y EN LAS MITOCONDRIAS TERPENOIDES VOLATILES QUE LAS PLANTAS UTILIZAN PARA DEFENDERSE INDIRECTAMENTE DEL ATAQUE POR INSECTOS HERBIVOROS (INTERACCIONES TRITROFICAS), LA DISPONIBILIDAD DE FPP PARA LA SINTESIS DE SESQUITERPENOS ESTA NORMALMENTE LIMITADA POR MECANISMOS REGULADORES HOMEOSTATICOS MUY POCO CARACTERIZADOS, PARA SUPERAR ESTA LIMITACION, PROPONEMOS REORIENTAR EL METABOLISMO DEL FPP CITOSOLICO DESTINADO A LA SINTESIS DE ESTEROLES HACIA LA PRODUCCION DE SESQUITERPENOS, DIRIGIENDO UNA SESQUITERPENO SINTASA MODELO, LA LINALOOL/NEROLIDOL SINTASA DE FRESA FANES1, A LAS MEMBRANAS DEL RE, TAMBIEN INTENTAREMOS INCREMENTAR LA PRODUCCION DE SESQUITERPENOS VOLATILES EN LAS MITOCONDRIAS AUMENTANDO EL FLUJO DE LA VIA DEL MVA EN EL CITOSOL-RE DE PLANTAS QUE EXPRESAN FANES1 Y LA ISOENZIMA FPS1L, YA SEA POR SEPARADO O EN FORMA DE FUSION QUIMERICA FPS1L-FANES1, EN ESTOS ORGANULOS, FINALMENTE, TAMBIEN SE INVESTIGARA EL POTENCIAL DE LAS MITOCONDRIAS COMO PLATAFORMA PARA PRODUCIR DITERPENOS VOLATILES A PARTIR DE GERANILGERANILDIFOSFATO EMPLEANDO APROXIMACIONES DE INGENIERIA METABOLICA EQUIVALENTES, LA CARACTERIZACION DEL CONJUNTO DE PLANTAS GENERADAS EN ESTE TRABAJO PROPORCIONARA, A SU VEZ, INFORMACION BASICA RELATIVA AL FUNCIONAMIENTO DE LA VIA DEL MVA EN PLANTAS, PLANTAS\METABOLISMO SECUNDARIO\INGENIERIA METABOLICA\MITOCONDRIAS\MEVALONATO\ESTEROLES\SESQUITERPENOS\DITERPENOS\PRENILTRANSFERASAS\TERPENOIDES VOLATILES.