IDENTIFICACION Y ANALISIS DE GENES REGULADOS POR AZUCARES EN ARABIDOPSIS THALIAN...
IDENTIFICACION Y ANALISIS DE GENES REGULADOS POR AZUCARES EN ARABIDOPSIS THALIANA: CONTROL DEL METABOLISMO DEL CARBONO Y PROCESOS DE DESARROLLO
EL CRECIMIENTO VEGETAL ESTA CONTROLADO POR MECANISMOS DE SEÑALIZACION ASOCIADOS AL DESARROLLO Y A CONDICIONES AMBIENTALES, ADEMAS DE POR EL ESTADO METABOLICO Y FISIOLOGICO DE LA PLANTA. LA PARTICION DEL CARBONO ENTRE TEJIDOS FUENT...
EL CRECIMIENTO VEGETAL ESTA CONTROLADO POR MECANISMOS DE SEÑALIZACION ASOCIADOS AL DESARROLLO Y A CONDICIONES AMBIENTALES, ADEMAS DE POR EL ESTADO METABOLICO Y FISIOLOGICO DE LA PLANTA. LA PARTICION DEL CARBONO ENTRE TEJIDOS FUENTE Y TEJIDOS SUMIDERO SE REGULA POR LA DISPONIBILIDAD DE CARBONO FIJADO Y POR LA CAPACIDAD DE LAS CELULAS PARA DETECTAR SU NIVEL, LO QUE AFECTA, A SU VEZ, A DIFERENTES PROCESOS DE DESARROLLO. ASI, LOS AZUCARES REGULAN LA EXPRESION DE UNA GRAN CANTIDAD DE GENES IMPLICADOS EN UN AMPLIO RANGO DE PROCESOS CELULARES, INCLUYENDO EL METABOLISMO DEL CARBONO Y DEL NITROGENO, VIAS DE TRANSDUCCION DE SEÑALES, SISTEMAS DE TRANSPORTE Y RESPUESTA A ESTRES. MEDIANTE LA ADICION EXOGENA DE AZUCARES A CULTIVOS VEGETALES SE HA DETERMINADO QUE TANTO LA GLUCOSA COMO LA SACAROSA AFECTAN DE MANERA MUY SIGNIFICATIVA A LA EXPRESION GENICA. SIN EMBARGO, ESTE TIPO DE ESTUDIOS NO REFLEJAN ESPECIFICAMENTE EL EFECTO DEL NIVEL INTRACELULAR DEL AZUCAR EN CUESTION, YA QUE HABRIA MUCHOS OTROS PROCESOS IMPLICADOS, COMO ABSORCION, TRANSPORTE, METABOLIZACION, ETC.A FIN DE ELIMINAR LA INTERFERENCIA DE TALES PROCESOS, SE PLANTEA GENERAR LINEAS DE ARABIDOPSIS THALIANA CON NIVELES INTRACELULARES DE AZUCARES MODIFICADOS Y ANALIZAR, EN ESTE CONTEXTO, LOS GENES CUYA EXPRESION SE ENCUENTRA ALTERADA. DISPONEMOS DE MUTANTES AFECTADOS EN GENES TANTO DEL METABOLISMO DEL ALMIDON COMO DE LA SACAROSA. EL MUTANTE APS1 CARECE DE ALMIDON, ES DE FLORACION TARDIA, POSEE MUY ALTOS NIVELES DE GLUCOSA Y NIVELES MODERADOS DE SACAROSA. EN ESTE PROYECTO, SE PROPONE OBTENER LINEAS MUTANTES CARENTES (O CON NIVELES MUY BAJOS) DE SACAROSA MEDIANTE EL CRUCE DE MUTANTES SIMPLES DE INSERCION DE T-DNA EN LOS GENES DE LA SINTESIS DE SACAROSA (LOS GENES DE SINTESIS DE SACAROSA PARECEN SER REDUNDANTES). EN ESTOS MUTANTES CON CAPACIDAD LIMITADA DE SINTESIS DE SACAROSA ESPERAMOS QUE LOS NIVELES DE GLUCOSA Y/O ALMIDON SEAN ELEVADOS, POR LO QUE SERIA UN BUEN SISTEMA PARA COMPARAR CON EL MUTANTE APS1. EL CRUCE DE LOS MUTANTES CARENTES DE SACAROSA CON EL MUTANTE APS1 PERMITIRA OBTENER LINEAS DE PLANTAS CARENTES DE ALMIDON Y SACAROSA, EN LAS QUE EN PRINCIPIO LOS NIVELES DE GLUCOSA DEBERIAN SER ELEVADOS. FINALMENTE, LA INTRODUCCION DE UNA CONSTRUCCION PARA RECUPERAR LA SINTESIS DE SACAROSA MEDIANTE EL TRATAMIENTO CON DEXAMETAZONA NOS PERMITIRA DISPONER DE PLANTAS CARENTES DE ALMIDON Y SACAROSA QUE TRAS LA INDUCCION AUMENTEN SUS NIVELES ENDOGENOS DEL DISACARIDO. LA OBTENCION DE LAS LINEAS DE ARABIDOPSIS QUE SE PROPONEN PERMITIRA LA REALIZACION DE ANALISIS TRANSCRIPTOMICOS CON EL FIN DE DETERMINAR LOS GENES GENUINAMENTE REGULADOS POR LOS NIVELES INTRACELULARES DE GLUCOSA Y/O SACAROSA. LOS ESTUDIOS SE COMPLEMENTARAN CON EL ANALISIS MEDIANTE PCR CUANTITATIVA EN TIEMPO REAL DE FACTORES DE TRANSCRIPCION, GENES DEL METABOLISMO DEL CARBONO O GENES IMPLICADOS EN PROCESOS DE DESARROLLO PARA CONFIRMAR LOS ESTUDIOS DE MICROMATRICES. PARA AQUELLOS GENES QUE SE CONFIRMEN MEDIANTE PCR Y SE CONSIDEREN DE ALTO INTERES, SE SOLICITARAN MUTANTES DE T-DNA A LAS COLECCIONES CORRESPONDIENTES PARA SU POSTERIOR CARACTERIZACION. ASIMISMO, SE REALIZARAN ANALISIS PROTEOMICOS DE NUCLEOS PARA DETECTAR FACTORES DE TRANSCRIPCION REGULADOS POR AZUCARES EN LOS FONDOS GENETICOS GENERADOS EN EL PROYECTO, LO QUE PERMITIRA, PARA EL CASO DE ESTE TIPO DE PROTEINAS, CORRELACIONAR SU NIVEL DE EXPRESION CON LOS DE PROTEINA EN EL NUCLEO. EGULACION GENICA\ARABIDOPSIS\PROTEOMICA\TRANSCRIPTOMICA\ALTERACION NIVELES AZUCARES\ALMIDON\SACAROSA\GLUCOSA\AZUCARESver más
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