Descripción del proyecto
EL CONSORCIO ENZIMATICO LIGNINOLITICO REPRESENTADO FUNDAMENTALMENTE POR OXIDORREDUCTASAS INESPECIFICAS, LACASAS Y PEROXIDASAS DE ALTO POTENCIAL REDOX, CONSTITUYE UNA DE LAS HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS DE MAYOR INTERES PARA PROCESOS DE BIOCATALISIS INDUSTRIAL Y MEDIOAMBIENTAL, ESTAS ENZIMAS SON PRODUCIDAS EN LA NATURALEZA POR LOS HONGOS DE PODREDUMBRE BLANCA DE LA MADERA, LO QUE LES CONFIERE LA CAPACIDAD UNICA DE DEGRADAR EL RECALCITRANTE POLIMERO DE LIGNINA DE LAS PAREDES CELULARES VEGETALES, ASI COMO GRAN VARIEDAD DE CONTAMINANTES AROMATICOS, DEBIDO A SU ELEVADA PROMISCUIDAD CATALITICA Y BAJOS REQUERIMIENTOS, LAS LACASAS (Y ALGUNAS PEROXIDASAS LIGNINOLITICAS) SE UBICAN DE LLENO EN EL CAMPO DE LA GREEN CHEMISTRY (ENCONTRANDO APLICACIONES POTENCIALES EN LA PRODUCCION DE BIOCOMBUSTIBLES DE 2ª Y 3ª GENERACION, PROCESOS DE BIORREMEDIACION, SINTESIS ORGANICA, BLANQUEO DE PASTAS DE PAPEL, O DISEÑO DE BIODISPOSITIVOS -BIOSENSORES Y BIOPILAS DE COMBUSTIBLE-, ETC), SIN EMBARGO, SU USO PRACTICO SE ENCUENTRA LIMITADO POR EL HECHO DE CARECER DE HERRAMIENTAS MOLECULARES ADECUADAS (INCLUYENDO HUESPEDES HETEROLOGOS PARA PROGRAMAS DE EVOLUCION DIRIGIDA) QUE FACILITEN SU DISEÑO Y MANIPULACION PARA MEJORAR SUS PROPIEDADES (EJ, ESTABILIDAD FRENTE A LA TEMPERATURA, RESISTENCIA A INHIBIDORES (HALUROS Y/O PEROXIDOS), ACTIVIDAD A PHS EXTREMOS ETC) PARA DETERMINADAS APLICACIONES, NUESTRO LABORATORIO LLEVA AÑOS TRABAJANDO EN EL DESARROLLO DE PLATAFORMAS PARA LA EVOLUCION MOLECULAR DIRIGIDA DE ESTOS Y OTROS SISTEMAS: MUY RECIENTEMENTE HEMOS DISEÑADO LACASAS DE ALTO POTENCIAL REDOX Y PEROXIDASAS VERSATILES POR EVOLUCION MOLECULAR DIRIGIDA PARA SU CORRECTA EXPRESION FUNCIONAL EN FORMA ESTABLE, ACTIVA Y SOLUBLE EN SACCHAROMYCES CEREVISIAE, BASANDONOS EN ESTOS SISTEMAS, EN LA PRESENTE PROPUESTA PRETENDEMOS ABORDAR LA OBTENCION DE OXIDORREDUCTASAS MAS ROBUSTAS Y MAS EFICIENTES PARA APLICACIONES CONCRETAS MEDIANTE TECNICAS DE EVOLUCION MOLECULAR DIRIGIDA, LOS OBJETIVOS FUNDAMENTALES DE ESTA PROPUESTA TIENEN UNA DOBLE VERTIENTE, PERO HACIENDO USO COMUN DE LA MAQUINARIA CELULAR DE S, CEREVISIAE COMO FACTORIA CELULAR:I) EVOLUCIONAR DE MANERA CONJUNTA GENES DE LACASAS DE ALTO POTENCIAL REDOX -INCLUYENDO LACASAS TERMOESTABLES, LACASAS AMARILLAS Y LACASAS EVOLUCIONADAS EN NUESTRO GRUPO PARA RESISTENCIA A COSOLVENTES- MEDIANTE HERRAMIENTAS DE RECOMBINACION GENETICA CON EL FIN DE OBTENER LACASAS CON PROPIEDADES MEJORADAS (ESTABILIDADES FRENTE A TEMPERATURA, PHS EXTREMOS, RESISTENCIA FRENTE A HALUROS O UTILIZACION ESPECIFICA DE MEDIADORES REDOX DE ORIGEN NATURAL), SE PLANTEA SU POSTERIOR RECOMBINACION PARA LA GENERACION DE GENES QUIMERA,II) EVOLUCIONAR PEROXIDASAS VERSATILES (UN TIPO DE PEROXIDASA LIGNINOLITICA DE INTERES BIOTECNOLOGICO DEBIDO A SU GRAN VERSATILIDAD DE OXIDACION) PARA CONFERIR RESISTENCIA A LA INHERENTE INACTIVACION POR PEROXIDO DE HIDROGENO PRESENTE EN TODAS LAS PEROXIDASAS DESCRITAS EN LA LITERATURA, EL ABORDAJE SERA TANTO EVOLUTIVO COMO SEMI-RACIONAL, SOMETIENDO DETERMINADAS REGIONES IMPLICADAS EN LA INACTIVACION DEL HEMO A MUTAGENESIS SATURADA COMBINATORIAL,FINALMENTE, SE PLANTEA LA CONSTRUCCION DE OPERONES ARTIFICIALES DE LAS MEJORES VARIANTES EVOLUCIONADAS EN S, CEREVISIAE (TANTO DE LACASAS Y PEROXIDASAS), CON LA FINALIDAD DE ESTUDIAR SU ACCION INDIVIDUAL Y CONJUNTA EN PROCESOS APLICADOS (TRATAMIENTO DE PASTA DE PAPEL, CONSTRUCCION DE BIO-NANODISPOSITIVOS 3D, PRODUCCION DE BIOCOMBUSTIBLES),