Descripción del proyecto
LA ORGANIZACION DE LAS REDES DE MICROTUBULOS ES CRITICA PARA CONTROLAR DIVERSOS ASPECTOS DE LA FISIOLOGIA CELULAR, LA GEOMETRIA DE LOS PATRONES MICROTUBULARES DEPENDE EN GRAN MEDIDA DE LA LOCALIZACION Y ACTIVIDAD DE LOS SITIOS DONDE LOS MICROTUBULOS SON NUCLEADOS, TALES SITIOS SUELEN AGRUPARSE EN ESTRUCTURAS CONOCIDAS COMO CENTROS ORGANIZADORES DE MICROTUBULOS QUE INCLUYEN EL CENTROSOMA Y EL APARATO DE GOLGI EN LA MAYORIA DE LAS CELULAS ANIMALES, Y OTRAS ESTRUCTURAS SUBCELULARES EN CELULAS Y TEJIDOS ESPECIALIZADOS, LA CO-EXISTENCIA DE VARIOS CENTROS ORGANIZADORES DE MICROTUBULOS EN LA MISMA CELULA PLANTEA LA CUESTION DE COMO SE COORDINAN SUS ACTIVIDADES, RECIENTEMENTE, NUESTRO GRUPO HA PUBLICADO QUE LA NUCLEACION DE MICROTUBULOS ES UN PROCESO REGULADO JERARQUICAMENTE CON EL CENTROSOMA CONTROLANDO EL APARATO DE GOLGI Y AMBOS INHIBIENDO EN ENSAMBLAJE DE MICROTUBULOS EN EL CITOPLASMA (GAVILAN ET AL, EMBO REPORTS, 2018), CON EL PRESENTE PROYECTO PRETENDEMOS AMPLIAR NUESTRO CONOCIMIENTO SOBRE COMO LOS CENTROS ORGANIZADORES DE MICROTUBULOS SON ACTIVADOS O NO Y COMO SE RELACIONAN ENTRE ELLOS, CONCRETAMENTE, NUESTRO OBJETIVO GENERAL ES OBTENER INFORMACION SOBRE LOS MECANISMOS MOLECULARES QUE GOBIERNAN LA ACTIVIDAD NUCLEADORA DEL APARATO DE GOLGI Y DEL CENTROSOMA ASI COMO SU COORDINACION A LO LARGO DE CICLO CELULAR, COMBINAREMOS LAS MAS AVANZADAS TECNICAS DE EDICION GENOMICA, PROTEOMICA, LIVE-IMAGING Y MICROSCOPIA DE SUPERRESOLUCION PARA ABORDAR ASPECTOS ESPECIFICOS DEL PROCESO DE NUCLEACION, EL PROYECTO PLANTEA DOS OBJETIVOS QUE SE CENTRAN EN EL CONTROL DE LA NUCLEACION DE MICROTUBULOS EN INTERFASE Y EN MITOSIS RESPECTIVAMENTE, DATOS PRELIMINARES DE LABORATORIO NOS INCITAN A EXPLORAR LA POSIBILIDAD DE QUE EL CONTROL QUE EJERCE EL CENTROSOMA SOBRE EL APARATO DE GOLGI ESTE MEDIADO POR LAS PROTEINAS CENTROSOMICAS CEP192 Y PERICENTRINA, INVESTIGAR LA EXISTENCIA DE MECHANISMOS DE NUCLEACION DE MICROTUBULOS INDEPENDIENTES DE GAMMA-TUBULINA QUE PODRIAN OPERAR EN PARALELO CON LA RUTA CONVENCIONAL DEPENDIENTE DE GAMMA-TUBULINA ES TAMBIEN DE GRAN IMPORTANCIA, PARA ABORDAR TALES CUESTIONES FABRICAREMOS LINEAS CELULARES QUE EXPRESEN LAS PROTEINAS CEP192 O GAMMA-TUBULIN EN FUSION CON EL SISTEMA DE DEGRADACION INDUCIBLE POR AUXINA (AID), ESTE SISTEMA PERMITE LA DEGRACION REVERSIBLE DE LAS PROTEINAS DE INTERES SIN COMPROMETER LA VIABILIDAD CELULAR, EN MITOSIS, LA ACTIVIDAD DEL CENTROSOMA AUMENTA MIENTRAS QUE LA DEL APARATO DE GOLGI ES SUPRIMIDA, USAREMOS LAS LINEAS CELULARES CEP192-AID Y GAMMA-TUBULINA-AID ASI COMO LA COLECCION DE LINEAS MUTADAS EN UNO O DOS DE LOS RECEPTORES CANONICOS DE GAMMA-TURCS QUE HEMOS GENERADO EN EL LABORATORIO EN LOS ULTIMOS AÑOS PARA EVALUAR SUS RESPECTIVAS CONTRIBUCIONES A LA ARQUITECTURA Y LA FUNCION DEL CENTROSOMA EN MITOSIS, EXAMINAR DICHAS LINEAS CELULARES MEDIANTE MICROSCOPIA DE SUPERRESOLUCION PROPORCIONARA INFORMACION RELEVANTE SOBRE EL POTENCIAL PAPEL ESTRUCTURAL DE TALES PROTEINAS EN LA CONSTRUCCION DEL HUSO MITOTICO, POR ULTIMO, DESARROLLAREMOS UN APROXIMACION PROTEOMICA PARA DESCIFRAR LOS MECANISMOS QUE CONTROLAN LA INHIBICION DEL LA ACTIVIDAD DEL APARATO DE GOLGI EN MITOSIS, NOS CENTRAREMOS EN LA PROTEINA AKAP450 QUE ES ESENCIAL PARA TAL PROCESO, COMPARANDO LA COMPOSICION DE LOS COMPLEJOS PROTEICOS QUE CONTIENEN LA PROTEINA AKAP450 AISLADOS DE CELULAS EN INTERFASE Y EN MITOSIS PODREMOS IDENTIFICAR AQUELLAS INTERACCIONES MOLECULARES POTENCIALMENTE SUSCEPTIBLES DE REGULACION CUANDO LA CELULA ENTRA EN MITOSIS, MICROTÚBULOS\CENTROSOMA\APARATO DE GOLGI\ARQUITECTURA CELULAR\MITOSIS\GAMMA-TUBULINA\EDICIÓN GENÓMICA\PROTEÓMICA\MICROSCOPÍA DE SUPPERRESOLUCIÓN